【摘 要】
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目的：构建一种基于突变型IgG4长铰链区和4-1BB共刺激域的靶向CD19的CAR-T细胞（CART19），并且在体内和体外证明其抗肿瘤的能力。方法：构建CD19 CAR的逆转录病毒载体，逆转录病毒转导植物血球凝集素（Phytohemagglutinin，PHA）刺激的健康志愿者T细胞，从而获得CART19细胞；采用流式细胞术和Western blot检测转导效率；采用流式细胞术检测细胞内CD10
【机 构】
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首都医科大学附属北京世纪坛医院临床基因与细胞工程中心
【基金项目】
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北京市科技计划脑科学专项基金项目（No.Z161100000216136）资助；
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目的：构建一种基于突变型IgG4长铰链区和4-1BB共刺激域的靶向CD19的CAR-T细胞（CART19），并且在体内和体外证明其抗肿瘤的能力。方法：构建CD19 CAR的逆转录病毒载体，逆转录病毒转导植物血球凝集素（Phytohemagglutinin，PHA）刺激的健康志愿者T细胞，从而获得CART19细胞；采用流式细胞术和Western blot检测转导效率；采用流式细胞术检测细胞内CD107a和IFN-γ水平，以及CFSE染色后的细胞增殖情况；4h荧光杀伤实验评估CART19细胞的体外抗肿瘤能力；ELISA法检测共培养上清的IFN-γ释放水平；建立白血病小鼠模型评估CART19细胞的体内抗肿瘤作用。结果：成功构建了一种新的CART19细胞；CD19+细胞可以特异性刺激CART19细胞表达CD107a和IFN-γ、促进CART19细胞增殖以及分泌IFN-γ；4h共培养荧光杀伤实验显示CART19细胞对NALM6-GL具有良好的体外抗肿瘤活性；CART19细胞可以明显提高白血病小鼠的生存率。结论：成功构建了可以有效治疗CD19+肿瘤的基于突变型IgG4长铰链区和4-1BB共刺激域CART19细胞，为下一步临床治疗奠定了基础。
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