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摘 要：本研究处方中的白及和酸浆采用正交设计实验，以提取时间、溶剂倍量和提取次数作为考察因素，以白及中1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯（militarine）收率、总多糖收率和总固体物为考察指标，筛选出白及口服液的最佳提取工艺参数。
关键词：白及口服液 制备工艺 1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯
贵州省大宗栽培的药材白及是兰科白芨属，为多年生草本植物，性苦、甘、涩、微寒，归肺、肝、胃经，具有收敛止血、消肿生肌的功效，主要用于治疗肺结核咳血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂等。《本草汇言》论述，“白及敛气，止血，消痈之要药也。此药极粘腻，性极收涩，封填破损，痈肿可消，溃败可托，死肌可去，脓血可洁，有托旧生新之妙用也。”由此可见，白及中的胶黏性成分（白及多糖）不仅有助于止血消痈，还具有封填破损、托旧生新的组织修复功能。现代临床研究证明，白及用于消化道溃疡和出血的疗效显著;其中，消化道大出血等一般可在6～18h止血。贵州省拥有大规模白及种植基地，其中，育苗种植中的从种源圃、组培育苗、大田炼苗，以及驯化苗栽培技术均为贵阳药用植物园自主研发，且在行业生产中处于领先水平。目前，种植基地主要以药材和育苗的形式销售白及，附加值较低。因此，如何有效提升白及的附加值，扩大白及产业链的发展成为当前亟需解决的问题。鉴于此，本课题组在中医药理论的指导下，适时提出以贵州省栽培的白及、酸浆等为配方原料，研制开发有助于改善肺部和胃肠道疾病的纯天然保健食品——白及清肺养胃口服液。
1 材料与方法
1.1 材料
白及、酸浆，均为市售;山梨酸钾（食品级），湖北盛天恒创生物科技有限公司;甜蜜素（食品级），山东尊宏生物科技有限公司。
1.2 制备方法
1.2.1 制法
以上两味——取白及饮片150g、酸浆100g，加水浸泡2h，煎煮3次（每次12倍量水），每次1小時;滤过，合并滤液，浓缩至每1mL含生药0.25g;加入山梨酸钾、甜蜜素，搅拌溶解，混匀;制成1000mL，分装，密封，灭菌，即得。
1.2.2 工艺流程图（见图1）
1.3 提取工艺研究
本方组方药材为白及和酸浆果，通过对白及进行化学成分研究，制备了1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品，并以1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯和多糖作为考察指标，对提取工艺进行优化。
1.3.1 含量测定方法
1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯含量测定：按照高效液相色谱法《中国药典》（2015年版四部 通则0512）进行测定。
多糖含量测定：按紫外-可见分光光度法《中国药典》（2015年版四部 通则0401）进行测定。
总固体测定：精确称取提取液50g置于干燥恒重的蒸发皿中水浴浓缩，得到浸膏后转移至干燥箱中，于60℃干燥3h，然后迅速称定重量，即得。
1.3.2 水煎煮提取工艺研究
根据文献资料及前期预实验结果，加水量、煎煮时间、煎煮次数是影响煎煮效果的主要因素，按每个因素3水平，采用L9（34）正交表（见表1）安排试验。水煮工艺采用正交试验进行筛选，以白及中1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯（militarine）收率、总多糖收率和总固体物为考察指标，对提取工艺进行综合评价。
2 结果与分析
2.1 样品制备
取白及30g、酸浆果20g，按正交实验条件（表1）进行试验，依法测定1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯、总多糖含量和总固体物，以3个指标的转移率为评价指标进行综合评价，权重系数分别为0.4、0.4、0.2，结果见表2。
2.2试验结果分析
将实验结果用SPSS 22.0软件进行处理，结果见表3。
从表2中的结果直观分析，各因素影响顺序为C>B>A;其中，煎煮次数对提取工艺的影响较大。表3方差分析结果表明，煎煮次数有显著性意义（P<0.05），而加水量和煎煮时间均无显著影响，故确定最佳工艺条件为A3B3C3。在A、B因素中，最佳工艺和次佳工艺的极差较小，故次佳工艺为A2B2C3。为进一步证实该工艺的合理性，以最佳工艺A3B3C3和次佳工艺A2B2C3进行重复试验，结果见表4。
从表4结果可见，乙工艺的militarine、多糖转移率和总固体物均高于甲工艺，且乙工艺有明显的低耗、省时特点，故选择乙工艺进行生产——加白及30g、酸浆果20g，12倍量的水，煎煮3次，每次1小时。
2.3 水煎煮提取工艺验证试验
按处方比例取白及60g、酸浆果40g，加12倍量的水，浸泡2h，煎煮1h，滤过，收集滤液，依法测定其中1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯（militarine）收率、总多糖收率和总固体物，结果见表5。
结果表明，1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯平均收率为69.29%，多糖平均收率为41.67%，总固体物为32.15g，说明水煎煮工艺稳定可行。
2.4 制剂添加剂的确定
2.4.1 山梨酸钾的用量
本品为保健品口服液，经水煎煮而得，为保证口服液在一定时间内品质不变，且稳定有效，是以需要加入一定量的防腐剂。经试验，加入0.1%的山梨酸钾作防腐剂较为合适。
2.4.2 甜蜜素的用量
作为中药水提物制备而成的口服液，该产品未添加矫味剂故比较苦涩，为提高口感需加入适量矫味剂。经试验，加入0.1%甜蜜素时，其甜味口感较为合适。
2.5 样品的制备
方中两味——白及切片、酸浆果剪为两半，用12倍量的水浸泡2小时，煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至生药量0.25g/mL。然后，加入山梨酸钾、甜蜜素，搅拌溶解，混匀，制成1000mL，分装，密封，灭菌，即得。
2.6 日剂量、装量、规格的确定
本方临床日用量为7.5g生药，每处方量药材（250g）是临床推荐日用量的33倍，制备1000mL，规格为10mL，每日用量为30mL，每1mL含生药0.25g，每日生药量为7.5g。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：103.
基金项目：贵州省科技厅科技支撑项目（黔科合[2016]支撑2856）。
作者简介：王勇（1985-），男，博士，副高，主要从事植物化学和药物分析研究。
关键词：白及口服液 制备工艺 1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯
贵州省大宗栽培的药材白及是兰科白芨属，为多年生草本植物，性苦、甘、涩、微寒，归肺、肝、胃经，具有收敛止血、消肿生肌的功效，主要用于治疗肺结核咳血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂等。《本草汇言》论述，“白及敛气，止血，消痈之要药也。此药极粘腻，性极收涩，封填破损，痈肿可消，溃败可托，死肌可去，脓血可洁，有托旧生新之妙用也。”由此可见，白及中的胶黏性成分（白及多糖）不仅有助于止血消痈，还具有封填破损、托旧生新的组织修复功能。现代临床研究证明，白及用于消化道溃疡和出血的疗效显著;其中，消化道大出血等一般可在6～18h止血。贵州省拥有大规模白及种植基地，其中，育苗种植中的从种源圃、组培育苗、大田炼苗，以及驯化苗栽培技术均为贵阳药用植物园自主研发，且在行业生产中处于领先水平。目前，种植基地主要以药材和育苗的形式销售白及，附加值较低。因此，如何有效提升白及的附加值，扩大白及产业链的发展成为当前亟需解决的问题。鉴于此，本课题组在中医药理论的指导下，适时提出以贵州省栽培的白及、酸浆等为配方原料，研制开发有助于改善肺部和胃肠道疾病的纯天然保健食品——白及清肺养胃口服液。
1 材料与方法
1.1 材料
白及、酸浆，均为市售;山梨酸钾（食品级），湖北盛天恒创生物科技有限公司;甜蜜素（食品级），山东尊宏生物科技有限公司。
1.2 制备方法
1.2.1 制法
以上两味——取白及饮片150g、酸浆100g，加水浸泡2h，煎煮3次（每次12倍量水），每次1小時;滤过，合并滤液，浓缩至每1mL含生药0.25g;加入山梨酸钾、甜蜜素，搅拌溶解，混匀;制成1000mL，分装，密封，灭菌，即得。
1.2.2 工艺流程图（见图1）
1.3 提取工艺研究
本方组方药材为白及和酸浆果，通过对白及进行化学成分研究，制备了1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品，并以1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯和多糖作为考察指标，对提取工艺进行优化。
1.3.1 含量测定方法
1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯含量测定：按照高效液相色谱法《中国药典》（2015年版四部 通则0512）进行测定。
多糖含量测定：按紫外-可见分光光度法《中国药典》（2015年版四部 通则0401）进行测定。
总固体测定：精确称取提取液50g置于干燥恒重的蒸发皿中水浴浓缩，得到浸膏后转移至干燥箱中，于60℃干燥3h，然后迅速称定重量，即得。
1.3.2 水煎煮提取工艺研究
根据文献资料及前期预实验结果，加水量、煎煮时间、煎煮次数是影响煎煮效果的主要因素，按每个因素3水平，采用L9（34）正交表（见表1）安排试验。水煮工艺采用正交试验进行筛选，以白及中1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯（militarine）收率、总多糖收率和总固体物为考察指标，对提取工艺进行综合评价。
2 结果与分析
2.1 样品制备
取白及30g、酸浆果20g，按正交实验条件（表1）进行试验，依法测定1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯、总多糖含量和总固体物，以3个指标的转移率为评价指标进行综合评价，权重系数分别为0.4、0.4、0.2，结果见表2。
2.2试验结果分析
将实验结果用SPSS 22.0软件进行处理，结果见表3。
从表2中的结果直观分析，各因素影响顺序为C>B>A;其中，煎煮次数对提取工艺的影响较大。表3方差分析结果表明，煎煮次数有显著性意义（P<0.05），而加水量和煎煮时间均无显著影响，故确定最佳工艺条件为A3B3C3。在A、B因素中，最佳工艺和次佳工艺的极差较小，故次佳工艺为A2B2C3。为进一步证实该工艺的合理性，以最佳工艺A3B3C3和次佳工艺A2B2C3进行重复试验，结果见表4。
从表4结果可见，乙工艺的militarine、多糖转移率和总固体物均高于甲工艺，且乙工艺有明显的低耗、省时特点，故选择乙工艺进行生产——加白及30g、酸浆果20g，12倍量的水，煎煮3次，每次1小时。
2.3 水煎煮提取工艺验证试验
按处方比例取白及60g、酸浆果40g，加12倍量的水，浸泡2h，煎煮1h，滤过，收集滤液，依法测定其中1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯（militarine）收率、总多糖收率和总固体物，结果见表5。
结果表明，1，4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯平均收率为69.29%，多糖平均收率为41.67%，总固体物为32.15g，说明水煎煮工艺稳定可行。
2.4 制剂添加剂的确定
2.4.1 山梨酸钾的用量
本品为保健品口服液，经水煎煮而得，为保证口服液在一定时间内品质不变，且稳定有效，是以需要加入一定量的防腐剂。经试验，加入0.1%的山梨酸钾作防腐剂较为合适。
2.4.2 甜蜜素的用量
作为中药水提物制备而成的口服液，该产品未添加矫味剂故比较苦涩，为提高口感需加入适量矫味剂。经试验，加入0.1%甜蜜素时，其甜味口感较为合适。
2.5 样品的制备
方中两味——白及切片、酸浆果剪为两半，用12倍量的水浸泡2小时，煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至生药量0.25g/mL。然后，加入山梨酸钾、甜蜜素，搅拌溶解，混匀，制成1000mL，分装，密封，灭菌，即得。
2.6 日剂量、装量、规格的确定
本方临床日用量为7.5g生药，每处方量药材（250g）是临床推荐日用量的33倍，制备1000mL，规格为10mL，每日用量为30mL，每1mL含生药0.25g，每日生药量为7.5g。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：103.
基金项目：贵州省科技厅科技支撑项目（黔科合[2016]支撑2856）。
作者简介：王勇（1985-），男，博士，副高，主要从事植物化学和药物分析研究。