【摘 要】
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目的：研究复方黄柏液涂剂（FFHBFP）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）毒力和生物膜的抑制作用，发现FFHBFP对MRSA的抗菌作用，为临床指导用药提供理论依据与参考。方法：首先采用微量稀释法和时间-生长曲线测定FFHBFP和万古霉素（VAN）对MRSA的最低抑菌浓度（MIC）和对细菌生长的影响；而后选择亚抑菌浓度（sub-MIC）分别观察FFHBFP和VAN对MRSA毒力因子脂肪酶的抑制能
【基金项目】
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科技部“中医药现代化研究”重点专项（2019YFC1709305）； 中国中医科学院科技创新工程中西医结合基础重大攻关项目（CI2021A00601）;中国中医科学院医学实验中心基本科研业务项目（zz2018018）； 李连达院士工作站专项经费项目（HX2017001）； 北京自然科学
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目的：研究复方黄柏液涂剂（FFHBFP）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）毒力和生物膜的抑制作用，发现FFHBFP对MRSA的抗菌作用，为临床指导用药提供理论依据与参考。方法：首先采用微量稀释法和时间-生长曲线测定FFHBFP和万古霉素（VAN）对MRSA的最低抑菌浓度（MIC）和对细菌生长的影响；而后选择亚抑菌浓度（sub-MIC）分别观察FFHBFP和VAN对MRSA毒力因子脂肪酶的抑制能力和恢复过氧化氢（H2O2）敏感性能力；采用微孔板法检测FFHBFP和VAN对MRSA生物膜形成期和成熟期的抑制能力；应用扫描电子显微镜（SEM）观察给药前后成熟生物膜在细菌形态方面的变化；结合实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测生药质量浓度50.600 g·L-1FFHBFP对MRSA毒力基因crt M和生物膜形成基因fnb A、ica A表达的影响，最后运用分子对接技术预测FFHBFP中潜在抗菌有效成分与MRSA毒力和生物膜的作用靶点机制。结果：VAN的MIC为2 mg·L-1，在1 mg·L-1以下时不影响MRSA生长，而FFHBFP无法测定出MIC，在生药质量浓度101.200～202.400 g·L-1时对生长有抑制作用；相比于空白组和VAN组，sub-MIC(生药质量浓度25.300～50.600 g·L-1)具有显著抑制脂肪酶和恢复MRSA对H2O2敏感（P＜0.01）；微孔板法结果显示FFHBFP(生药质量浓度25.300～202.400 g·L-1)对生物膜形成期和成熟期均有明显抑制作用（P＜0.05,P＜0.01）;SEM显示FFHBFP使生物膜结构疏松，菌体大小不一；生药质量浓度50.600 g·L-1质量浓度FFHBFP能显著抑制相关的毒力基因和生物膜形成基因的表达（P＜0.05,P＜0.01），同时分子对接结果也显示FFHBFP主要抗菌活性成分对作用靶点有较好的结合能力。结论：FFHBFP对MRSA没有直接杀灭的能力，而是通过削弱毒力表达和生物膜形成等致病能力来发挥临床疗效。
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