双链断裂修复蛋白hKu70缺陷细胞株的建立及其生物学特性

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目的建立并鉴定DNA双链断裂(DSB)修复蛋白hKu70缺陷细胞株,并观察该缺陷细胞的某些生物学效应,用于hKu70基因功能及职业有害因素对DNA双链断裂修复影响的研究.方法用构建的hKu70基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-C1-K)转染人胚肺成纤维细胞(HLF),用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中hKu70基因的表达水平.同时观察转染细胞生长形态,绘制生长曲线,软琼脂培养法鉴定恶性程度.结果pEGFP-C1-K载体在转染细胞内可较稳定表达,hKu70蛋白缺陷细胞株hKu70基因的蛋白表达水平下降了42%,转染后hKu70蛋白缺陷细胞生长形态、生长速度无明显变化,软琼脂培养未见细胞集落.结论成功建立和鉴定了hKu70蛋白缺陷细胞株,该缺陷不足以单独引起可观察的某些生物学效应.

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