【摘 要】
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目的构建携带小鼠信号转导子及转录激活子3(STAT3)的重组慢病毒载体,并检测STAT3的蛋白表达,进行慢病毒包装并鉴定。方法将小鼠成肌细胞总RNA通过STAT3引物逆转录为cDNA PCR
【机 构】
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重庆市渝北区人民医院泌尿外科,重庆医科大学附属第一医院泌尿外科
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目的构建携带小鼠信号转导子及转录激活子3(STAT3)的重组慢病毒载体,并检测STAT3的蛋白表达,进行慢病毒包装并鉴定。方法将小鼠成肌细胞总RNA通过STAT3引物逆转录为cDNA PCR扩增、回收后,同pLVX-IRES-ZsGreen1载体片段连接,酶切鉴定及测序,将pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3转染293T细胞,48h后收集细胞,Western blot检测STAT3表达量,通过瞬时转染法包装出病毒上清。结果测序结果证实STAT3成功插入pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒载体,成功构建了慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3,共转染293T细胞48h,Western blot检测STAT3表达量明显增强。测定病毒滴度为8.4×107 TU/mL。结论成功构建了STAT3基因的重组慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础。
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