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摘要：目的 建立高效液相色谱法测定柴连辛口服液中连翘苷的含量的方法。方法 采用Alltima C185µ 250mm×4.6mm色谱柱；乙腈：水(25：75)为流动相；检测波长278nm。结果 连翘苷浓度的线性范围为0.618µg-3.09µg,r=0.9999。平均加样回收率为99.37%,RSD=1.83%。
结论 该方法简便、准确、重复性好。可作为该制剂的定量分析方法。
关键词：柴连辛口服液 连翘苷 高效液相色谱法
中图分类号：R285 文献标识码：B 文章编号：1004-7484（2011）18-0103-02
我院制剂柴连辛口服液由麻黄、柴胡、广藿香、肉桂、连翘等药味经加工制成，具有解表宣肺、化湿和中的作用。连翘为中医常用的清热解毒药，有清热解毒、消肿散结的功效，具有清热解毒、散结消肿之功效，主治温热、丹毒、斑疹、痈疡肿毒、瘰疬、小便淋闭等症，其活性成分连翘苷为本方的重要有效成分。质量标准中未对连翘苷作鉴别和含量的要求。为有效控制产品质量，保证疗效，笔者参考相关文献，建立高效液相色谱(HPLC)法测定指标成分连翘苷，为柴连辛口服液的质量控制提供参考，获得了较为理想的结果，现报告如下：
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪、515 泵、2487紫外检测器、717自动进样系统、柱温箱。乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所批号：0821-200104)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Alltima C18 5µ 250mm×4.6mm色谱柱；流动相：乙腈：水(25：75)；检测波长278nm；流速：1.0ml%•min-1；柱温：35℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取连翘苷对照品15.45mg，置50ml容量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度，摇匀。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取本品约2ml，置中性氧化铝柱(200目，6g，内径1cm，用70%乙醇30ml预洗后备用)，加70%乙醇40ml，洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加5%甲醇适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系考察
分别配置浓度为0.0618、0.07725、0.1545、0.23175、0.309mg•ml-1连翘苷标准溶液进样，进样量10µl，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，连翘苷的进样量为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程为：Y=6.2185×106X-8144.2，r=0.9999，结果显示连翘苷进样量在0.618～3.09µg范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10µL，重复进样5次，测得对照品溶液峰面积，计算RSD=0.6%，(n=5)表明精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液10µL，分别于0、6、12、18、24h进样测定，结果24h内测定结果稳定，RSD=2.77%(n=5)。
2.7 空白实验
按处方制备缺连翘的阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备成阴性样品溶液。按样品测定方法测试，结果在连翘苷对照品峰处未出现色谱峰，说明按本文的实验条件测定，缺样空白无干扰。
2.8 重复性试验
取同批样品(批号为07022111)5份，按样品测定项下方法测定，结果RSD=1.20%，结果表明本方法重现性较好。
2.9 加样回收试验
精密量取已知含量的柴连辛口服液(样品含量为0.404mg•ml-1)适量5份，分别置中性氧化铝柱(200目，6g，内径1cm，用70%乙醇30ml预洗后备用)上，各精密加入对照品适量，照供试品溶液制备法制备，测定连翘苷的含量。平均回收率为99.37% RSD=1.83%(n=5)，测定结果(见表1)。
表1 加样回收率实验结果
称取样品量/ml 样品中连翘苷含量/mg 加入连翘苷量/mg 测得量 回收率% 平均回收率% RSD%
1.00 0.404 0.3708 0.781 101.67 99.37 1.83
1.00 0.404 0.3708 0.765 97.30
1.00 0.404 0.3708 0.769 98.38
1.00 0.404 0.3708 0.770 98.65
1.00 0.404 0.3708 0.778 100.86
2.10 样品测定
取对照品溶液及供试品溶液各适量过0.45µm微孔滤膜，每次进样10µl，外标法，测定连翘苷含量。批号为07020143，07022041，07022111样品中连翘苷的含量分别为0.090 mg•ml-1，0.375 mg•ml-1，0.404 mg•ml-1。
3 討论
本品采用中性氧化铝柱洗脱的前处理方法，可以除去大量的杂质，同时不会造成指标成分连翘苷的损失，把对设备的损害尽可能降到最低程度。检测波长的确定：取连翘苷对照品溶液在200～350nm波长范围内进行扫描，其最大吸收波长为278nm，因此采用278nm作为连翘苷的检测波长。笔者对比我院不同批号的柴连辛口服液，发现3批样品中连翘苷的含量相差很大，原因可能与原药材连翘的产地、采集时间、加工炮制及前处理过程有关。为保证药品质量，确保疗效，有必要控制柴连辛口服液制剂中的连翘苷含量。
本法操作简便，杂质对分离无干扰，选择性强，灵敏度高，可作为本院制剂柴连辛口服液的质量控制方法。
参考文献
[1] 国家药典委员会编.国家药品监督管理局药品标准新药转正标准(第十六至二十六册)[Z]2002.534.
[2] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005,118.
[3] 李会勤.清喉咽合剂中连翘苷的含量测定[J].当代医学,2011,17(3):51～52.
结论 该方法简便、准确、重复性好。可作为该制剂的定量分析方法。
关键词：柴连辛口服液 连翘苷 高效液相色谱法
中图分类号：R285 文献标识码：B 文章编号：1004-7484（2011）18-0103-02
我院制剂柴连辛口服液由麻黄、柴胡、广藿香、肉桂、连翘等药味经加工制成，具有解表宣肺、化湿和中的作用。连翘为中医常用的清热解毒药，有清热解毒、消肿散结的功效，具有清热解毒、散结消肿之功效，主治温热、丹毒、斑疹、痈疡肿毒、瘰疬、小便淋闭等症，其活性成分连翘苷为本方的重要有效成分。质量标准中未对连翘苷作鉴别和含量的要求。为有效控制产品质量，保证疗效，笔者参考相关文献，建立高效液相色谱(HPLC)法测定指标成分连翘苷，为柴连辛口服液的质量控制提供参考，获得了较为理想的结果，现报告如下：
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪、515 泵、2487紫外检测器、717自动进样系统、柱温箱。乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所批号：0821-200104)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Alltima C18 5µ 250mm×4.6mm色谱柱；流动相：乙腈：水(25：75)；检测波长278nm；流速：1.0ml%•min-1；柱温：35℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取连翘苷对照品15.45mg，置50ml容量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度，摇匀。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取本品约2ml，置中性氧化铝柱(200目，6g，内径1cm，用70%乙醇30ml预洗后备用)，加70%乙醇40ml，洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加5%甲醇适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系考察
分别配置浓度为0.0618、0.07725、0.1545、0.23175、0.309mg•ml-1连翘苷标准溶液进样，进样量10µl，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，连翘苷的进样量为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程为：Y=6.2185×106X-8144.2，r=0.9999，结果显示连翘苷进样量在0.618～3.09µg范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10µL，重复进样5次，测得对照品溶液峰面积，计算RSD=0.6%，(n=5)表明精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液10µL，分别于0、6、12、18、24h进样测定，结果24h内测定结果稳定，RSD=2.77%(n=5)。
2.7 空白实验
按处方制备缺连翘的阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备成阴性样品溶液。按样品测定方法测试，结果在连翘苷对照品峰处未出现色谱峰，说明按本文的实验条件测定，缺样空白无干扰。
2.8 重复性试验
取同批样品(批号为07022111)5份，按样品测定项下方法测定，结果RSD=1.20%，结果表明本方法重现性较好。
2.9 加样回收试验
精密量取已知含量的柴连辛口服液(样品含量为0.404mg•ml-1)适量5份，分别置中性氧化铝柱(200目，6g，内径1cm，用70%乙醇30ml预洗后备用)上，各精密加入对照品适量，照供试品溶液制备法制备，测定连翘苷的含量。平均回收率为99.37% RSD=1.83%(n=5)，测定结果(见表1)。
表1 加样回收率实验结果
称取样品量/ml 样品中连翘苷含量/mg 加入连翘苷量/mg 测得量 回收率% 平均回收率% RSD%
1.00 0.404 0.3708 0.781 101.67 99.37 1.83
1.00 0.404 0.3708 0.765 97.30
1.00 0.404 0.3708 0.769 98.38
1.00 0.404 0.3708 0.770 98.65
1.00 0.404 0.3708 0.778 100.86
2.10 样品测定
取对照品溶液及供试品溶液各适量过0.45µm微孔滤膜，每次进样10µl，外标法，测定连翘苷含量。批号为07020143，07022041，07022111样品中连翘苷的含量分别为0.090 mg•ml-1，0.375 mg•ml-1，0.404 mg•ml-1。
3 討论
本品采用中性氧化铝柱洗脱的前处理方法，可以除去大量的杂质，同时不会造成指标成分连翘苷的损失，把对设备的损害尽可能降到最低程度。检测波长的确定：取连翘苷对照品溶液在200～350nm波长范围内进行扫描，其最大吸收波长为278nm，因此采用278nm作为连翘苷的检测波长。笔者对比我院不同批号的柴连辛口服液，发现3批样品中连翘苷的含量相差很大，原因可能与原药材连翘的产地、采集时间、加工炮制及前处理过程有关。为保证药品质量，确保疗效，有必要控制柴连辛口服液制剂中的连翘苷含量。
本法操作简便，杂质对分离无干扰，选择性强，灵敏度高，可作为本院制剂柴连辛口服液的质量控制方法。
参考文献
[1] 国家药典委员会编.国家药品监督管理局药品标准新药转正标准(第十六至二十六册)[Z]2002.534.
[2] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005,118.
[3] 李会勤.清喉咽合剂中连翘苷的含量测定[J].当代医学,2011,17(3):51～52.