【摘 要】
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目的 探讨Slc4a11缺失在先天性遗传性角膜内皮营养不良(congenital hereditary endothelial dystrophy,CHED)发病中的作用及其与自噬信号通路的潜在调控关系.方法 利用CRISPR/Cas9技术构建Slc4a11基因敲除小鼠模型.以野生型小鼠(wild type,WT)和Slc4a11基因敲除小鼠(knockout,KO)为实验对象,通过Western印迹法、RT-qPCR、茜素红染色、H-E染色、透射电镜评估KO小鼠角膜表型特征的变化.通过Western印迹
【机 构】
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同济大学附属同济医院眼科,上海 200065
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目的 探讨Slc4a11缺失在先天性遗传性角膜内皮营养不良(congenital hereditary endothelial dystrophy,CHED)发病中的作用及其与自噬信号通路的潜在调控关系.方法 利用CRISPR/Cas9技术构建Slc4a11基因敲除小鼠模型.以野生型小鼠(wild type,WT)和Slc4a11基因敲除小鼠(knockout,KO)为实验对象,通过Western印迹法、RT-qPCR、茜素红染色、H-E染色、透射电镜评估KO小鼠角膜表型特征的变化.通过Western印迹法和RT-qPCR检测自噬标志物LC3、beclin1、p62在角膜内皮的表达量.透射电镜观察两组小鼠角膜内皮细胞自噬情况.结果 Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示与CHED相似的表型特征,包括角膜厚度增加;角膜内皮细胞体积增大,密度减小;后弹力层增厚;角膜内皮空泡形成.KO小鼠与WT小鼠相比,LC3、beclin1的mRNA和蛋白的相对表达量上升,差异有统计学意义(P<0.05),而p62的mRNA和蛋白的相对表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05).KO小鼠角膜内皮细胞内自噬体明显多于WT小鼠.结论 利用CRISPR/Cas9技术构建的Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示CHED特征的表型.同时Slc4a11缺失通过增强自噬信号通路参与CHED的发病机制.
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