【摘 要】
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捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是绵羊(Ovis aries)、山羊(Capra hircus)等反刍动物重要的寄生虫之一,可造成养殖业的巨大经济损失.基于转录组研究,本课题组前期从捻转
【机 构】
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内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018西北农林科技大学动物医学院,杨凌712100;内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼
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捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是绵羊(Ovis aries)、山羊(Capra hircus)等反刍动物重要的寄生虫之一,可造成养殖业的巨大经济损失.基于转录组研究,本课题组前期从捻转血矛线虫耐药虫株中鉴定获得耐药基因—ABC(ATP-binding cassette)转运蛋白基因(GenBank No.MT478136).本研究拟分析ABC转运蛋白基因的生物信息学特征,建立ABC转运蛋白的可溶性诱导表达及纯化体系,为进一步探究ABC转运蛋白参与的耐药机制提供参考依据.首先利用在线软件对ABC进行蛋白质结构分析及抗原表位预测,结果显示,ABC分子式为C928H1502N270O265S7,属于不含跨膜区和信号肽的亲水性蛋白质,二级结构主要以延伸链为主;ABC转运蛋白的抗原性较高,含有较多的抗原表位.利用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)扩增ABC转运蛋白基因,经酶切连接构建重组质粒pET30a(+)-ABC,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21后进行诱导表达条件的优化,以0.6 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)于37℃诱导7 h可重组表达1 mg/mL ABC转运蛋白.本研究成功诱导表达并纯化了捻转血矛线虫重组ABC转运蛋白,可为深入开展其潜在耐药机制及免疫原性研究工作提供基础资料.
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