【摘 要】
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目的 制备基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)/骨形成发生蛋白-2(BMP4)壳聚糖缓释体,联合体外分离培养的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),探讨其作为组织工程支架材料修复骨缺损的可行性.方法 体外分离培养兔BMSCs,观察不同代次细胞的生长情况,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测绘制生长曲线,用流式细胞术检测其干细胞表面标志CD44、CD90的表达,体外诱导成软骨分化,甲苯胺蓝染色鉴定,Tra
【机 构】
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目的 制备基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)/骨形成发生蛋白-2(BMP4)壳聚糖缓释体,联合体外分离培养的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),探讨其作为组织工程支架材料修复骨缺损的可行性.方法 体外分离培养兔BMSCs,观察不同代次细胞的生长情况,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测绘制生长曲线,用流式细胞术检测其干细胞表面标志CD44、CD90的表达,体外诱导成软骨分化,甲苯胺蓝染色鉴定,Transwell法检测SDF-1对兔BMSCs的趋化作用,用冷冻干燥及乳化交联法制备SDF-1/BMP-2壳聚糖缓释体,扫描电镜观察缓释体性状,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其细胞因子缓释作用,接种兔BMSCs,检测缓释体对兔BMSCs增殖及成骨分化的影响,比较成骨相关指标碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原等蛋白的分泌差异.结果 密度梯度离心法联合差速贴壁法可获得高纯度、增殖能力强并具有分化潜能的兔BMSCs,第3代兔BMSCs CD44表达率为(86.3±6.5)％,090表达率为(73.50±4.85)％,SDF-1可趋化兔BMSCs向壳聚糖缓释体迁移,并促进其黏附生长,SDF-1/BMP-2复合壳聚糖支架构成缓释体可促进兔BMSCs成骨及其相关蛋白分泌增加.结论 SDF-1/BMP-2壳聚糖缓释体可作为理想的组织工程骨修复材料。
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