【摘 要】
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目的:使用杆状病毒载体表达系统在无血清悬浮培养的条件下进行Kringle5的表达。方法:对草地夜蛾卵巢细胞(Sf9)进行无血清培养驯化。构建Kringle5重组杆状病毒,通过三级扩增的
【机 构】
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汕头大学医学院分子生物学中心; 汕头大学医学院分子生物学中心 广东汕头515041; 广东汕头515041;
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目的:使用杆状病毒载体表达系统在无血清悬浮培养的条件下进行Kringle5的表达。方法:对草地夜蛾卵巢细胞(Sf9)进行无血清培养驯化。构建Kringle5重组杆状病毒,通过三级扩增的方法制备重组病毒贮存液。Western方法确定Krin-gle5在Sf9细胞中的表达形式和表达条件。在培养体积为500 mL的无血清悬浮培养条件下对Kringle5进行表达。应用Ni2+亲合层析纯化了表达的重组蛋白,去除了氨基端融合的His-tag。应用原代培养人脐静脉内皮细胞测定了重组Kringle5的活性。结果:重组Kringle5蛋白的产量为1.7 mg/L,半数有效剂量(ED50)为109.2 nmol/L,去除氨基端His-tag序列后获得的Kringle5ED50为59.59 nmol/L。结论:Kringle5可以在无血清悬浮培养Sf9细胞中进行高效表达,研究结果为进行Kringle5的大规模高效表达奠定了基础。
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