观察组织工程神经联合川芎嗪移植修复大鼠坐骨神经缺损的效果。
方法55只成年SD大鼠按随机数字表法分为4组,A、B、C组各15只,D组10只,实验侧均为右后肢坐骨神经。10 g/L戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,显露坐骨神经,从梨状肌下缘0.5 cm处切除神经1.5 cm,分别用4种移植物桥接神经缺损:去细胞异体神经种植神经干细胞(NSCs)在含川芎嗪培养液中培养1周构成组织工程神经(A组)、去细胞异体神经种植NSCs在普通培养液中培养1周构成组织工程神经(B组)、去细胞异体神经(C组)、自体神经(D组)。术后每天A组术侧注射川芎嗪液,B、C、D组注射等体积9 g/L等渗盐水,连续注射12周至实验结束。通过术后2周行坐骨神经功能指数(SFI)测定、神经电生理检测、免疫荧光、免疫组化检测;术后12周行SFI测定、神经电生理检测、免疫荧光、免疫组化、辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪、再生神经纤维检测、透射电镜、腓肠肌湿重等指标观察神经修复情况。
结果术后2周各组SFI测定和电生理检测结果差异无统计学意义;免疫荧光A、B组均可见大量强荧光,C组未见荧光细胞;免疫组化A、B组以巢蛋白阳性细胞为主。术后12周,A组SFI为-17.52±2.41,B组为-25.74±2.85,C组为-36.12±3.41,D组为-15.87±2.26;A组较B、C组差异有统计学意义(P<0.05),与D组差异无统计学意义(P>0.05)。A组神经传导速度为(9.43±0.40)m/s,B组为(7.76±0.31)m/s,C组为(5.87±0.67)m/s,D组为(10.16±0.39)m/s;A组较B、C组差异有统计学意义(P<0.05),与D组差异无统计学意义(P>0.05)。NSCs能在体内存活、迁移并分化为神经元和胶质细胞。HRP标记的细胞数A组为(885.40±19.91)个,B组为(684.57±38.37)个,C组为(390.33±43.41)个,D组为(941.67±32.54)个;A、D组较B、C组差异有统计学意义(P<0.05)。甲苯胺蓝染色示A组移植段再生神经纤维较多,以有髓神经纤维为主。
结论去细胞异体神经种植NSCs在含川芎嗪培养液中培养构成组织工程神经,能有效修复大鼠坐骨神经缺损,促进周围神经再生及下肢运动功能的恢复。