论文部分内容阅读
目的 探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)在体外是否可定向诱导分化为肝细胞及其方法.方法采用梯度离心法,分离纯化SD大鼠的MSCs,流式细胞仪检测和碱性磷酸酶染色鉴定细胞类型.根据培养基中肝细胞生长因子(HGF)浓度不同,将MSCs分为4组进行诱导分化:A组0 ng/ml, B组10 ng/ml,C组20 ng/ml,D组40 ng/ml.倒置显微镜连续观察细胞分化过程的形态学变化.于培养的1,3,7,14,21,28 d,分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞免疫组化检测各组细胞甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白18(CK18)和白蛋白的基因和蛋白表达.结果分离纯化的SD大鼠MSCs的表面标志为CD29+,CD44+,CD34-,CD45-和CD90+,细胞的碱性磷酸酶染色阴性,细胞纯度达98%以上.C组与D组的MSCs,于培养第7天出现AFP基因表达,第14天表达增强,第28天表达减弱;第14天始出现白蛋白、CK18基因表达,而后持续.B组和A组在培养过程中,未出现AFP、CK18和白蛋白的表达.C组与D组MSCs的AFP细胞免疫组化染色培养第7天即出现阳性,第14天白蛋白和CK18免疫组化染色阳性.A组和B组的MSCs的AFP、白蛋白和CK18的免疫组化染色均阴性.结论成年大鼠MSCs在较高浓度的HGF的诱导下,可分化为肝细胞。