探讨新一代基因测序平台(HiSeq2000)在甲基丙二酸血症(MMA)诊断中的价值。
方法1.采集已经临床确诊的9例MMA患儿外周血并提取DNA，将设计好的基因捕获探针与患儿DNA文库混合，然后利用基因捕获联合高通量测序分析技术对有机酸代谢相关的48个基因全部外显子区域进行测序。2.获得原始数据，去除接头和过滤低质量数据，对数据进行SNP、InDel等分析，并采用Sanger测序方法对异常位点进行测序验证。3.气相色谱-质谱联用分析技术对尿液标本的有机酸测定及其他辅助检查。
结果1.突变基因：7例存在MMACHC基因突变，7例患儿中共检测出7种突变，包括c.482G>A、c.567_568insT、c.609G>A、c.440_441del、c.80A>G、c.315C>G、c.90G>A，其中c.440_441del为未见报道突变；1例存在甲基丙二酰辅酶A变位酶(MUT)基因突变，均为内含子异常，分别是c.754-1G>C、c.1677-1G>A，其中c.754-1G>C为未见报道突变；1例未检测到突变。2.临床症状：9例患儿均存在智力运动发育迟缓，伴抽搐3例，反复顽固性代谢性酸中毒、头痛及面瘫、反复性溶血各1例。脑电图异常9例，头颅磁共振异常8例，尿液中甲基丙二酸水平均升高(273.4～146 022.8倍)，血同型半胱氨酸水平增高8例(27.13～396.84 μmol/L，正常<20 μmol/L)。3.Sanger测序验证：均符合新一代测序平台结果，无假阳性存在。
结论1.进一步证明c.609G>A突变位点为中国MMA合并同型半胱氨酸血症患儿的热点突变位点。MMA基因突变类型较多，与临床症状无明显相关性。2.推测MMACHC基因c.440_441del突变及MUT基因c.754-1G>C突变为新发突变。3.基因捕获联合高通量基因测序技术一次性捕获突变基因数量大，获取疾病的遗传信息量广，具有高通量、高灵敏度、高效等特点，适合于MMA患儿检测，也可为其他儿科临床常见遗传性疾病的检测提供参考。