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在简述数值微分零交点法分辨重叠谱的原理基础上，研究了该方法对不同分离度的两组分重叠谱图的分辨效果，结果表明，对于两条高斯型重叠谱线，当分离度Ｒ≥０．０７时，可有效地分辨两组分的谱图，对于前舌和拖尾的重叠谱体系，实现有效分辨的分离度的最低限也随峰变形程度的增加而增大。以Ｌ－色氨酸和ＤＬ－酪氨酸两组分重叠紫外光谱图的分辨为例，讨论了方法在两组分同时测定中的应用。