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[摘 要]目的建立筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的高效液相色谱测定方法。方法用二氯甲烷甲醇（4∶1）提取样品，ODSC18色谱柱，甲醇水（80∶20）为流动相，流速0.8 ml/min，检测波长270 nm，外标法定量分析。结果分离度1.8，RSD=1.59%，平均回收率104.6%。结论 该法分离度、精密度及稳定性好，可作为筋骨消痛丸的质量控制方法。
[关键词]筋骨痛消丸 质量控制
中图分类号：TH365 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0387-01
筋骨痛消丸是国家三类中药，由丹参、鸡血藤、香附、桂枝、白芍、川牛膝等组成，具有活血行气、温经通络、消肿止痛的功能，主治骨质增生引起的关节疼痛、肿胀、活动受限等症。筋骨痛消丸质量标准规定用薄层扫描法测定丹参ⅡA酮含量，由于薄层扫描法的定量精度较低，稳定性不高，不利于产品的生产和质量控制。为此，本文用高效液相色谱技术，建立了筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的HPLC快速测定法，以提高产品质控精度，保证产品生产和质量的稳定性。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
Waters 510 高效液相色谱泵，Waters486 检测器，U6K 进样器，Baseline 810 色谱工作站。
1.2 试剂
丹参酮ⅡA标准对照品为 中国 药物生物制品鉴定所生产，筋骨痛消丸为河南省洛正制药厂产品[（97）卫药准字Z106号]，甲醇（色谱纯），重蒸水，二氯甲烷（分析醇）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
高效液相色谱柱Zorbax，ODS-C18 （4.6 mm × 250 mm， 5 μm）， 美国杜邦公司；流动相为甲醇-水（80：20）；流速 0.8 ml/min；检测波长 270 nm，灵敏度 0.05AUFS，柱温为室温。
2.2 供试液制备
取筋骨痛消丸样品及阴性对照样品适量研成细粉，精确称取细粉1.20 g 置于25 ml离心管中，加 10 ml 二氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶剂，超声提取 30 min，离心取上清，残渣重复提取两次，合并3次上清液，水浴回收溶剂至干，残留物用甲醇溶解并定容至 25 ml，经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液为供试液。
2.3 柱效与分离度
用标准对照品溶液测得色谱柱理论塔板数为 12840，样品中丹参酮ⅡA峰与邻峰的分离度为 1.8，阴性对照样品在目标峰位置无吸收峰干扰。
2.4 线性关系与标准曲线
称取丹参酮ⅡA标准品 10.00 mg，用甲醇溶解，定容至 10 ml为1.00 mg/ml的标准贮液。分别吸取一定量标准贮液，稀释至浓度为 1～800 μg/ml的系列标准溶液。进样10 μl，测定目标峰积分面积，以色谱峰积分面积为纵坐标，以标准浓度为横坐标作图，结果在 10～400 μg/ml 浓度范围内，色谱峰积分面积与进样浓度线性关系良好，线性回归方程为 Y=1.011 64×108X-1.15×106，相关系数 r=0.999 6。
2.5 回收率测定
取已知丹参酮ⅡA含量的筋骨痛消丸样品细粉约 1.00 g，精密称量 5 份，每份精密加入定量的丹参酮ⅡA标准对照品，混合后按样品处理方法处理，进样 10 μl，测定目标峰面积，用标准曲线 计算 样品中丹参酮 ⅡA的含量，计算结果样品中丹参酮ⅡA回收率为 104.6%。
2.6 精密度与重复性
用标准对照品溶液连续进样 10 次，测得精密度RSD=1.12%，对同一样品细粉同时取 6 个样，按上述方法提取、分析，重复性 RSD=1.59%。
2.7 丹参酮ⅡA的热稳定性分析
样品供试液制备后，分别在室温常规条件下和冷藏避光条件下保存10 min，4，8，12，24 h和48 h，分别测定各放置時间样品中的丹参酮ⅡA含量，测定结果表明，供试液在室温常规条件下保存8 h内，或冷藏避光条件下保存24 h内测定，不会影响分析结果。
2.8 样品含量测定
分别取3个批号的筋骨痛消丸样品，按上述方法处理制备供试液，测定样品中丹参酮ⅡA含量，3批样品中的含量分别为 0.035 4%，0.033 9%，0.034 8%。
3 讨论
参考相关文献 ，对比研究了甲醇、二氯甲烷、二氯甲烷-甲醇不同比例的溶剂对筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的提取效果，结果用二氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶剂对筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的提取较完全。本方法有较好的分离度和精密度。样品供试液制备后，在室温下8 h内或在闭光的条件下48 h内有较好的稳定性，可以作为产品的质量控制指标。
参考文献
[1]冯坤， 陈保龙，谢文，高效液相色谱法测定筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的含量，论文网，2011.05
[2]谭生建，王文明，胡文祥，等.HPLC法测定通脉冲剂中丹参ⅡA的含量的研究[J]. 中国 中药杂志，1999，24（9）：545.
[3]杨毅恒，张晓乐，王淑庆，等.乳结消散片中丹参酮ⅡA的含量测定[J].中国药学杂志，2001，36（1）：56.
[4]于 彤，吴秀清.高效液相色谱法测定复方丹参颗粒中丹参酮ⅡA的含量[J].中药材，1998，21（8）：421.
[关键词]筋骨痛消丸 质量控制
中图分类号：TH365 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0387-01
筋骨痛消丸是国家三类中药，由丹参、鸡血藤、香附、桂枝、白芍、川牛膝等组成，具有活血行气、温经通络、消肿止痛的功能，主治骨质增生引起的关节疼痛、肿胀、活动受限等症。筋骨痛消丸质量标准规定用薄层扫描法测定丹参ⅡA酮含量，由于薄层扫描法的定量精度较低，稳定性不高，不利于产品的生产和质量控制。为此，本文用高效液相色谱技术，建立了筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的HPLC快速测定法，以提高产品质控精度，保证产品生产和质量的稳定性。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
Waters 510 高效液相色谱泵，Waters486 检测器，U6K 进样器，Baseline 810 色谱工作站。
1.2 试剂
丹参酮ⅡA标准对照品为 中国 药物生物制品鉴定所生产，筋骨痛消丸为河南省洛正制药厂产品[（97）卫药准字Z106号]，甲醇（色谱纯），重蒸水，二氯甲烷（分析醇）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
高效液相色谱柱Zorbax，ODS-C18 （4.6 mm × 250 mm， 5 μm）， 美国杜邦公司；流动相为甲醇-水（80：20）；流速 0.8 ml/min；检测波长 270 nm，灵敏度 0.05AUFS，柱温为室温。
2.2 供试液制备
取筋骨痛消丸样品及阴性对照样品适量研成细粉，精确称取细粉1.20 g 置于25 ml离心管中，加 10 ml 二氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶剂，超声提取 30 min，离心取上清，残渣重复提取两次，合并3次上清液，水浴回收溶剂至干，残留物用甲醇溶解并定容至 25 ml，经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液为供试液。
2.3 柱效与分离度
用标准对照品溶液测得色谱柱理论塔板数为 12840，样品中丹参酮ⅡA峰与邻峰的分离度为 1.8，阴性对照样品在目标峰位置无吸收峰干扰。
2.4 线性关系与标准曲线
称取丹参酮ⅡA标准品 10.00 mg，用甲醇溶解，定容至 10 ml为1.00 mg/ml的标准贮液。分别吸取一定量标准贮液，稀释至浓度为 1～800 μg/ml的系列标准溶液。进样10 μl，测定目标峰积分面积，以色谱峰积分面积为纵坐标，以标准浓度为横坐标作图，结果在 10～400 μg/ml 浓度范围内，色谱峰积分面积与进样浓度线性关系良好，线性回归方程为 Y=1.011 64×108X-1.15×106，相关系数 r=0.999 6。
2.5 回收率测定
取已知丹参酮ⅡA含量的筋骨痛消丸样品细粉约 1.00 g，精密称量 5 份，每份精密加入定量的丹参酮ⅡA标准对照品，混合后按样品处理方法处理，进样 10 μl，测定目标峰面积，用标准曲线 计算 样品中丹参酮 ⅡA的含量，计算结果样品中丹参酮ⅡA回收率为 104.6%。
2.6 精密度与重复性
用标准对照品溶液连续进样 10 次，测得精密度RSD=1.12%，对同一样品细粉同时取 6 个样，按上述方法提取、分析，重复性 RSD=1.59%。
2.7 丹参酮ⅡA的热稳定性分析
样品供试液制备后，分别在室温常规条件下和冷藏避光条件下保存10 min，4，8，12，24 h和48 h，分别测定各放置時间样品中的丹参酮ⅡA含量，测定结果表明，供试液在室温常规条件下保存8 h内，或冷藏避光条件下保存24 h内测定，不会影响分析结果。
2.8 样品含量测定
分别取3个批号的筋骨痛消丸样品，按上述方法处理制备供试液，测定样品中丹参酮ⅡA含量，3批样品中的含量分别为 0.035 4%，0.033 9%，0.034 8%。
3 讨论
参考相关文献 ，对比研究了甲醇、二氯甲烷、二氯甲烷-甲醇不同比例的溶剂对筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的提取效果，结果用二氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶剂对筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的提取较完全。本方法有较好的分离度和精密度。样品供试液制备后，在室温下8 h内或在闭光的条件下48 h内有较好的稳定性，可以作为产品的质量控制指标。
参考文献
[1]冯坤， 陈保龙，谢文，高效液相色谱法测定筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的含量，论文网，2011.05
[2]谭生建，王文明，胡文祥，等.HPLC法测定通脉冲剂中丹参ⅡA的含量的研究[J]. 中国 中药杂志，1999，24（9）：545.
[3]杨毅恒，张晓乐，王淑庆，等.乳结消散片中丹参酮ⅡA的含量测定[J].中国药学杂志，2001，36（1）：56.
[4]于 彤，吴秀清.高效液相色谱法测定复方丹参颗粒中丹参酮ⅡA的含量[J].中药材，1998，21（8）：421.