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[摘 要]文章分析了肝愈胶囊的质量控制标准。
[关键词]肝愈胶囊 黄芩苷 鉴别
中图分类号：P618.21 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0359-01
肝愈胶囊由黄芩、丹参、栀子、黄柏、黄芪、五味子等中药组成，具有清热解毒、益气活血的功效。主治气阴两虚型肝炎。为控制本品的内在质量，本实验采用TLC，HPLC等方法对其进行质量标准研究。
1 仪器与试药
Waters600E2487型高效液相色谱仪﹙美国﹚；Millennium色谱工作站数据处理系统﹙美国﹚；BP211D 电子 天平﹙德国﹚。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。黄芩苷﹙7159908﹚供含量测定用，纯度99.02%﹚、丹参酮ⅡА﹙07669903﹚、栀子苷﹙07499806﹚、盐酸小檗碱﹙7139813﹚、黄芪甲苷﹙07819806﹚、五味子乙素﹙07659706﹚，对照品均购自 中国 药品生物制品检定所。肝愈胶囊3批样品：040105，040108，040111﹙自制﹚。硅胶G﹙青岛海洋化工厂﹚。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别
2.1.1 丹参的鉴别
取本品内容物3 g，研细，加乙醚20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材粗粉1 g和按处方量从中除去丹参药材的阴性对照品粗粉4 g，分别同法制成对照药材溶液和阴性对照液。再取丹参酮ⅡA对照品，加醋酸乙酯制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述4种溶液各6 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯﹙19∶1﹚为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱在相应的位置上无此斑点。
2.1.2 栀子的鉴别
取本品内容物3 g，加乙醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至约2 ml，作为供试品溶液。另取栀子对照药材粗粉1 g和按处方量从中除去栀子的阴性对照品粗粉3 g，分别加乙醇10 ml和20 ml，同法制成对照药材溶液和阴性溶液。再取栀子苷对照品，加乙醇制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水﹙5∶5∶1∶1﹚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱中无相应的斑点。
2.1.3 黄柏的鉴别
取本品内容物2 g，加甲醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材粗粉0.2 g和按处方量从中除去黄柏的阴性对照品粗粉2 g，分别加甲醇10 ml和20 ml，加热回流提取15 min，过滤，滤液浓缩至干，各加1 ml甲醇使溶解，分别作为对照药材溶液和阴性对照溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各3 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液﹙6∶3∶1.5∶1.5∶0.5﹚为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯﹙365nm﹚下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。
2.1.4 黄芪的鉴别
取本品内容物4 g，加正丁醇30 ml，超声处理1 h，滤过，滤液用1%氢氧化钠溶液洗涤3次，20 ml/次，弃去碱液，用正丁醇饱和的水洗至中性，弃去水液，正丁醇浓缩至干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。。另取黄芪对照药材粗粉1 g和按处方量从中除去黄芪的阴性对照品粗粉4 g，分别加正丁醇15 ml和30 ml，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為对照品溶液。吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各8μl，对照药材溶液6 μl，对照品溶液4 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水﹙10∶20∶11∶5﹚10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
2.1.5 五味子的鉴别
取本品内容物5 g，置索氏提取器中，加氯仿30 ml，回流提取3 h，回收氯仿，残渣加氯仿2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材粗粉2 g和按处方量从中除去五味子的阴性对照品粗粉5 g，分别置索氏提取器中，各加氯仿15 ml和30 ml，同法制成对照药材溶液和对照品溶液。再取五味子乙素对照品，加氯仿制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性溶液各5μl，对照品溶液3 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以石油醚﹙30～60℃﹚-甲酸乙酯-甲酸﹙15∶5∶1﹚的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯﹙254 nm﹚下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。 见图5。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件的选择
色谱柱KromasilC18﹙200 mm×4.6 mm，5 μm﹚，流动相：甲醇-水-冰醋酸﹙55∶45∶0.5﹚流速1.0 ml/min；检测波长280 nm；柱温25℃；理论板数按黄芩苷峰计应不低于1 500。 2.2.2 标准曲线的制备
精密称取干燥至恒重的黄芩苷对照品2.92 mg，置50 ml量瓶中，加适量甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含0.005 84 mg的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以黄芩苷进样量微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得一直线， 计算 回归方程为 Y=2.43×106X-3.74×104，r=0.999 7（n=5﹚.结果表明黄芩苷在0.1168～0.584 0 μg范围内线性关系良好。
2.2.3 精密度实验
精密吸取浓度为0.005 84 mg/ml的黄芩苷对照品溶液5 μl，重复进样5次，均值为609 299，RSD=0.90%﹙n=5﹚，结果表明仪器精密度良好。
2.2.4 稳定性实验
精密吸取供试品溶液5 μl，注入液相色谱仪，分别于0，1，3，7，12 h测定峰面积。结果表明峰面积的RSD为0.90%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。
2.2.5 空白实验
取样品和按处方比例不含黄芩的诸药，按制剂工艺分别制成供试品溶液和阴性对照液，精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，依法测定，结果阴性对照品溶液在与黄芩苷对照品溶液相同保留时间处无色谱峰，表明无干扰。见图6。
2.2.6 重复性实验
取同一批号样品，按供试品制备方法平行制备5份，依法测定黄芩苷峰面积，分别计算含量，RSD为1.24%，表明重复性良好。
2.2.7样品含量测定
取3批样品依法制备供试品溶液，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，计算樣品中黄芩苷的含量。
3 讨论
在黄柏的薄层色谱鉴别实验中，黄柏鉴别项下的展开剂，醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水﹙10∶6∶1∶1﹚进行实验，结果分离效果不好，Rf值较小，相邻斑点分不开。后来选用黄连鉴别项下的展开剂，经过多次调整，把展开剂中的水换成浓氨试液，即展开剂为苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5）效果较好，结果较稳定。
采用文献方法对肝愈胶囊进行薄层色谱鉴别，重现性好，阴性实验无干扰，经多批样品鉴别，均能检出与对照药材相同的斑点。
参考文献
[1] 付克 闫广利 刘伟华，肝愈胶囊的质量标准研究，论文网，2011，06
[关键词]肝愈胶囊 黄芩苷 鉴别
中图分类号：P618.21 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0359-01
肝愈胶囊由黄芩、丹参、栀子、黄柏、黄芪、五味子等中药组成，具有清热解毒、益气活血的功效。主治气阴两虚型肝炎。为控制本品的内在质量，本实验采用TLC，HPLC等方法对其进行质量标准研究。
1 仪器与试药
Waters600E2487型高效液相色谱仪﹙美国﹚；Millennium色谱工作站数据处理系统﹙美国﹚；BP211D 电子 天平﹙德国﹚。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。黄芩苷﹙7159908﹚供含量测定用，纯度99.02%﹚、丹参酮ⅡА﹙07669903﹚、栀子苷﹙07499806﹚、盐酸小檗碱﹙7139813﹚、黄芪甲苷﹙07819806﹚、五味子乙素﹙07659706﹚，对照品均购自 中国 药品生物制品检定所。肝愈胶囊3批样品：040105，040108，040111﹙自制﹚。硅胶G﹙青岛海洋化工厂﹚。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别
2.1.1 丹参的鉴别
取本品内容物3 g，研细，加乙醚20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材粗粉1 g和按处方量从中除去丹参药材的阴性对照品粗粉4 g，分别同法制成对照药材溶液和阴性对照液。再取丹参酮ⅡA对照品，加醋酸乙酯制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述4种溶液各6 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯﹙19∶1﹚为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱在相应的位置上无此斑点。
2.1.2 栀子的鉴别
取本品内容物3 g，加乙醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至约2 ml，作为供试品溶液。另取栀子对照药材粗粉1 g和按处方量从中除去栀子的阴性对照品粗粉3 g，分别加乙醇10 ml和20 ml，同法制成对照药材溶液和阴性溶液。再取栀子苷对照品，加乙醇制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水﹙5∶5∶1∶1﹚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱中无相应的斑点。
2.1.3 黄柏的鉴别
取本品内容物2 g，加甲醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材粗粉0.2 g和按处方量从中除去黄柏的阴性对照品粗粉2 g，分别加甲醇10 ml和20 ml，加热回流提取15 min，过滤，滤液浓缩至干，各加1 ml甲醇使溶解，分别作为对照药材溶液和阴性对照溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各3 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液﹙6∶3∶1.5∶1.5∶0.5﹚为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯﹙365nm﹚下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。
2.1.4 黄芪的鉴别
取本品内容物4 g，加正丁醇30 ml，超声处理1 h，滤过，滤液用1%氢氧化钠溶液洗涤3次，20 ml/次，弃去碱液，用正丁醇饱和的水洗至中性，弃去水液，正丁醇浓缩至干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。。另取黄芪对照药材粗粉1 g和按处方量从中除去黄芪的阴性对照品粗粉4 g，分别加正丁醇15 ml和30 ml，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為对照品溶液。吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各8μl，对照药材溶液6 μl，对照品溶液4 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水﹙10∶20∶11∶5﹚10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
2.1.5 五味子的鉴别
取本品内容物5 g，置索氏提取器中，加氯仿30 ml，回流提取3 h，回收氯仿，残渣加氯仿2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材粗粉2 g和按处方量从中除去五味子的阴性对照品粗粉5 g，分别置索氏提取器中，各加氯仿15 ml和30 ml，同法制成对照药材溶液和对照品溶液。再取五味子乙素对照品，加氯仿制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性溶液各5μl，对照品溶液3 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以石油醚﹙30～60℃﹚-甲酸乙酯-甲酸﹙15∶5∶1﹚的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯﹙254 nm﹚下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。 见图5。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件的选择
色谱柱KromasilC18﹙200 mm×4.6 mm，5 μm﹚，流动相：甲醇-水-冰醋酸﹙55∶45∶0.5﹚流速1.0 ml/min；检测波长280 nm；柱温25℃；理论板数按黄芩苷峰计应不低于1 500。 2.2.2 标准曲线的制备
精密称取干燥至恒重的黄芩苷对照品2.92 mg，置50 ml量瓶中，加适量甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含0.005 84 mg的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以黄芩苷进样量微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得一直线， 计算 回归方程为 Y=2.43×106X-3.74×104，r=0.999 7（n=5﹚.结果表明黄芩苷在0.1168～0.584 0 μg范围内线性关系良好。
2.2.3 精密度实验
精密吸取浓度为0.005 84 mg/ml的黄芩苷对照品溶液5 μl，重复进样5次，均值为609 299，RSD=0.90%﹙n=5﹚，结果表明仪器精密度良好。
2.2.4 稳定性实验
精密吸取供试品溶液5 μl，注入液相色谱仪，分别于0，1，3，7，12 h测定峰面积。结果表明峰面积的RSD为0.90%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。
2.2.5 空白实验
取样品和按处方比例不含黄芩的诸药，按制剂工艺分别制成供试品溶液和阴性对照液，精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，依法测定，结果阴性对照品溶液在与黄芩苷对照品溶液相同保留时间处无色谱峰，表明无干扰。见图6。
2.2.6 重复性实验
取同一批号样品，按供试品制备方法平行制备5份，依法测定黄芩苷峰面积，分别计算含量，RSD为1.24%，表明重复性良好。
2.2.7样品含量测定
取3批样品依法制备供试品溶液，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，计算樣品中黄芩苷的含量。
3 讨论
在黄柏的薄层色谱鉴别实验中，黄柏鉴别项下的展开剂，醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水﹙10∶6∶1∶1﹚进行实验，结果分离效果不好，Rf值较小，相邻斑点分不开。后来选用黄连鉴别项下的展开剂，经过多次调整，把展开剂中的水换成浓氨试液，即展开剂为苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5）效果较好，结果较稳定。
采用文献方法对肝愈胶囊进行薄层色谱鉴别，重现性好，阴性实验无干扰，经多批样品鉴别，均能检出与对照药材相同的斑点。
参考文献
[1] 付克 闫广利 刘伟华，肝愈胶囊的质量标准研究，论文网，2011，06