【摘 要】
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本研究中,构建了含有编码绿色荧光蛋白的改进型基因质粒 pJPM5.用基因枪法分别把pJPM5 和另一带有绿色荧光蛋白基因的质粒pSBG700转入水稻TNG67愈伤组织.用Southern杂交法证
【机 构】
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云南省农科院生物技术研究所分子生物学研究室,康乃尔大学分子生物学和遗传学系
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本研究中,构建了含有编码绿色荧光蛋白的改进型基因质粒 pJPM5.用基因枪法分别把pJPM5 和另一带有绿色荧光蛋白基因的质粒pSBG700转入水稻TNG67愈伤组织.用Southern杂交法证实了转基因的存在,而且表明多数转基因植株含有1 到8个拷贝的转基因.取2个月的转基因植株上的叶片用于分析绿色荧光蛋白基因表达.用SL M-8000荧光分析仪定量测定绿色荧光蛋白.多数转基因植株具有很高的绿色荧光蛋白信号. 虽然水稻植株有少量自发荧光,但是绿色荧光蛋白基因表达出的绿色荧光蛋白信号比植株的自发荧光强得多,其测定不会受自发荧光的太大影响.在荧光显微镜下观察到了绿色荧光蛋白基因的表达.借助观察分析绿色荧光蛋白基因的瞬时表达,本研究还发现基因枪法转化中 ,如果两枪的气压为900psi & 1350 psi,比两枪的气压都为900psi或者1350psi更好,因其能使质粒进入更多的细胞.研究结果表明,绿色荧光蛋白基因可以作为水稻(甚至小麦、玉米)转基因研究中的报告基因.研究还显示,MAR序列能明显增强绿色荧光蛋白基因的表达能力(这一结果在另文讨论).
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