【摘 要】
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目的 建立一种高效构建β-地中海贫血CD17（A＞T）点突变基因型HEK293T细胞系的方法。方法 利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑技术，即无痕基因组编辑（consecutive re-Guide or re-Cas steps to erase CRISPR/Cas-blocked targets, CORRECT），通过电转染CRISPR/Cas9质粒诱导HEK293T细胞HBB基因切
【机 构】
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广州中医药大学第一附属医院生殖医学科
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81270750）；
论文部分内容阅读
目的 建立一种高效构建β-地中海贫血CD17（A＞T）点突变基因型HEK293T细胞系的方法。方法 利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑技术，即无痕基因组编辑（consecutive re-Guide or re-Cas steps to erase CRISPR/Cas-blocked targets, CORRECT），通过电转染CRISPR/Cas9质粒诱导HEK293T细胞HBB基因切割，同时以引入有CD17（A＞T）点突变和同义突变碱基（G＞T）的单链寡核苷酸（singlestranded oligo DNA nucleotides, ssODNs）作为同源模板进行重组，经单克隆筛选、测序验证获得β-珠蛋白基因（HBB）点突变CD17（A＞T）基因型HEK293T细胞系。结果 利用“CORRECT”技术成功获得一株β-地贫CD17（A＞T）基因型点突变的HEK293T细胞系，同义突变的引入减少Cas9蛋白对靶点不准确的再编辑，提高单碱基突变效率。结论 通过“CORRECT”技术可以高效获得点突变的293T细胞系，对单碱基突变疾病模型的细胞系及动物模型的建立具有重要意义。
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