【摘 要】
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目的 探讨上调或沉默miRNA-1(miR-1)表达对胃癌细胞体外表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)敏感性影响的研究.方法 选择人胃癌细胞系MKN-45作为受试对象,慢病毒转染miR-1或miR-1 shRNA,分别作为miR-1组和miR-1 shRNA组,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测GES-1和MKN-45细胞中miR-1表达.另外设置空白对照组和阴性对照组.采用MTT法检测MKN-45细胞对不同浓度AZD9291(奥西替尼)的敏感性;流式细胞术检测1μmol/L AZ
【机 构】
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222061 江苏连云港 连云港市第一人民医院肿瘤科;222061 连云港市第一人民医院精准医学实验室
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目的 探讨上调或沉默miRNA-1(miR-1)表达对胃癌细胞体外表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)敏感性影响的研究.方法 选择人胃癌细胞系MKN-45作为受试对象,慢病毒转染miR-1或miR-1 shRNA,分别作为miR-1组和miR-1 shRNA组,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测GES-1和MKN-45细胞中miR-1表达.另外设置空白对照组和阴性对照组.采用MTT法检测MKN-45细胞对不同浓度AZD9291(奥西替尼)的敏感性;流式细胞术检测1μmol/L AZD9291作用48 h后MKN-45细胞凋亡活力和细胞周期.采用Western blotting法检测各组细胞中PI3K/AKT通路相关蛋白的表达.结果 qPCR证实miR-1在MKN-45细胞系中低表达.MTT法检测结果显示,与空白对照组比较,miR-1组细胞对AZD9291敏感性明显增加,而miR-1 shRNA组细胞对AZD9291敏感性明显降低.Annexin V/PI双染法和BrdU法检测,miR-1组细胞凋亡率为(44.65±5.18)％,高于空白对照组的(15.40±2.13)％和阴性对照组的(17.92±3.14)％,差异有统计学意义(P<0.05).miR-1 shRNA组细胞凋亡率为(11.20±2.48)％,低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05).与空白对照组和阴性对照组比较,miR-1组细胞IGF-1R、p-IGF-1R、p-AKT、p-p70S6K蛋白表达量明显降低,miR-1 shRNA组细胞IGF-1R、p-IGF-1R、p-AKT、p-p70S6K蛋白表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 上调miR-1表达可增加MKN-45胃癌细胞系对AZD9291的敏感性,其作用机制可能与抑制IGF-1R/PI3K/AKT信号通路的激活有关.
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