【摘 要】
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目的:应用黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)表达质粒瞬时转染肝星状细胞(HSCs),探讨FRNK选择性抑制黏着斑激酶(FAK)磷酸化对FN刺激的HSCs凋亡的影响。方法:在体外培养HSCs,以FN刺
【基金项目】
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河北省自然科学基金资助项目(No.301361);河北省卫生厅资助项目(No.2003055);河北省普通高校强势特色学科专项经费部分资助
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目的:应用黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)表达质粒瞬时转染肝星状细胞(HSCs),探讨FRNK选择性抑制黏着斑激酶(FAK)磷酸化对FN刺激的HSCs凋亡的影响。方法:在体外培养HSCs,以FN刺激HSCs增殖,采用脂质体介导的方法进行FRNK表达质粒转染。应用膜联蛋白(Annexin-V)/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术、DNA凝胶电泳技术和透射电镜技术检测细胞的凋亡,Western blotting及RT-PCR方法检测FRNK、FAK、p-FAK(Tyr397)、caspase-3蛋白及其mRNA表达。结果:FRNK表达质粒成功转染HSCs,在翻译后水平抑制FAK磷酸化;FRNK表达质粒转染HSCs48h后,细胞凋亡率增加,与空质粒组之间有显著差异[(25.37±1.92)%vs(9.28±1.05)%],P<0.01,伴随caspase-3在翻译和转录水平的增高[(264.17±12.60vs185.82±9.69),P<0.01;(4.19±0.48vs1.07±0.27),P<0.01]。结论:在脂质体介导下瞬时转染FRNK表达质粒,可使外源性的FRNK在HSCs内大量表达,在翻译后水平抑制FAK磷酸化;可以诱导FN刺激的HSCs发生凋亡。
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