【摘 要】
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【目的】拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验，分析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响，为解析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础。【方法】采集牦牛背最长肌组织，采用酶消化法和差速贴壁法分离牦牛肌内前体脂肪细胞；构建包装lncFAM200B超表达腺病毒，设计合成其siRNA干扰序列；通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）分析lncFAM200B
【机 构】
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西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省教育部重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金（31902153）； 四川省科技计划（2019YJ0257）； 国家肉牛牦牛产业技术体系项目（CARS-37）；
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【目的】拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验，分析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响，为解析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础。【方法】采集牦牛背最长肌组织，采用酶消化法和差速贴壁法分离牦牛肌内前体脂肪细胞；构建包装lncFAM200B超表达腺病毒，设计合成其siRNA干扰序列；通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）分析lncFAM200B超表达与干扰后脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、AP2,lncFAM200B潜在靶基因SIRT1、PTEN的表达水平；采用油红O染色、甘油三酯（TAG）测定、CCK-8检测等方法检测细胞内脂滴沉积情况、甘油三酯含量变化及细胞增殖情况。【结果】从牦牛背最长肌成功分离获得肌内前体脂肪细胞；lncFAM200B超表达后，脂肪分化标志基因C/EBPα、AP2表达量显著升高（P＜0.05），随着诱导分化时间的增加，lncFAM200B潜在靶基因SIRT1表达量呈先降低后升高的趋势，PTEN表达量呈现先增高后降低趋势；细胞脂滴沉积显著增加（P＜0.05），且胞内形成较大脂滴；超表达4 d后，细胞内甘油三酯含量显著增加（P＜0.05）。干扰lncFAM200B可显著降低脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、AP2的表达水平（P＜0.05），降低细胞脂肪沉积，且诱导分化第6天细胞内甘油三酯含量显著降低（P＜0.05）；干扰lncFAM200B后其潜在靶基因SIRT1呈现先升高后降低的表达趋势，PTEN则相反。CCK-8增殖实验表明，lncFAM200B超表达72 h后，细胞增殖效率显著降低（P＜0.05），而干扰lncFAM200B后72 h后细胞增殖效率显著增强（P＜0.05）。【结论】lncFAM200B可能通过影响脂肪分化标志基因C/EBPα和AP2，脂肪合成相关基因SIRT1和PTEN的表达从而影响牦牛肌内脂肪沉积，但其具体机制还需要进一步研究。
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