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摘 要：在进行硒酵母中硒含量测定方法研究的过程中，常用的测定方法主要有有机硒、总硒、无机硒等测定方法，在进行研究的过程中，相关人员要建立有机硒和无机硒的测定的方法，并且还要将有机硒和无机硒分离处理，采用透析的方法对其进行处理，对五种晒酵母采用不同的培养条件对其进行培养，才能为添加剂领域和医药领域的发展提供科学、合理的数据。
关键词：酵母;有机硒;无机硒
1 试验部分
1.1 主要仪器与试剂
Backman公司DU一7分光光度计1、2、3、4、5为5种不同含硒量的硒酵母在培养基中添加不同量的亚硒酸钠，接种酵母菌，在3O℃下培养48h而得。变色酸：0.03tool·L-1，称取变色酸1.0930g，定容至100ml。盐酸苯肼：0.03mol·L-1。称取0.4400g盐酸苯肼，定容至100ml。EDTA：0.02tool·L-1，称取EDTA钠盐0.7450g定容至100m|。氯酸钾：0.6mol·L-1，称取7.3500g氯酸钾。
1#、2#、3#、4#、5#为5种不同含硒量的硒酵母：在培养基中添加不同量的亚硒酸钠.接种酵母菌.在30°C下培养48h而得。
变色酸：0.03mol·L-1，称取变色酸1.0930g.定容至100ml。
盐酸苯肼：0.03mol·L-1，称取0.4400g盐酸苯肼，定容至100ml。
EDTA：0.02mol·L-1，称取EDTA钠盐0.7450g定容至100ml。
氯酸钾：0.6mol·L-1，称取7.3500g氯酸钾、定容至100ml。
HCI-KC1缓冲液：0.2tool·L，取浓盐酸2.50ml稀释至150ml;再取氯化钾2.2500g，定容至150ml，两者混匀。
亚硒酸标液：称取亚硒酸0.08167g，定容至500ml，然后再稀释500倍混合酸：浓硝酸400ml与高氯酸100ml，混匀。
1.2 分析方法
1.2.1 样品
消化称取硒酵母样品0.2g于锥形瓶中，加入混合酸lo～15ml，加热至发烟，待溶液变为淡黄色后，再加热2～3min，此时溶液变为无色，冷却后，定容，即可进行测定。
1.2.2 标准曲线绘制
分别取含硒0.2g·ml-1。的亚硒酸标准液，0，l，2，3，4，5ml于比色管中，加入EDTAlm1，缓冲液2m1，氯酸钾2ml，变色酸2ml，盐酸苯肼lml，加水至15ml，摇匀，在沸水浴中加热20rain，于冷水中冷却后.用lcm比色皿于520nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
2 结果与讨论
2.1 消化方法试验
本文用硝酸一高氯酸、去硒硫酸一高氯酸一钼酸铺的方法消化。硝酸一高氯酸方法比较费时一但测定结果与真实值基本接近.绝对误差为0.0054g-相对误差为0.87;去硒硫酸一高氯酸一铝酸钠方法比较简单、快速.但是测定结果高于真实值.可能是钼离子对测定结果有影响，其绝对误差为0.0293g.相对误差为6.40。为此采用硝酸一高氯酸的消化方法。
2.2 加热时间的影响
在试验过程中发现加热时间对删定结果影响较大，如果增加加热时闻，不但空白值增大.测定结果也偏高;缩短加热时间.则浓度怫度不明顯一重复性也不好。分别进行了加热15，20.25rain试验.结果表明，加热20mln时，测定结果最接近于真实值.重复性也最好。通过五组试验，测得其标准偏差为4.65，相对标准偏差为0.83。
2.3 可靠性检验
将亚硒酸标准样按测定硒酵母中总硒占量的方法进行测定.稚取亚硒酸标样0.2469g.测得其舍硒量为0.6122g，而其理论计算值为0.6176g，误差为00054g，相对误差为087，试验表明，该方法具有高的灵敏度和选择性，测定下限为0.25rig·m1，回收率为（100±6.5）。
2.4 有机硒-总硒的检测方法
标准硒的制备 取已知含量的亚硝酸钠适量，精密称定，加价硝酸溶液（1-30）制成1ul中含硒1.00ug的溶液或使用国家标准硒溶液。
硒对照纸的准备 精密量取标准硒溶液20ul滴加到3x3cm定量色谱滤纸上，吹干，折好后备用或精密量取国家标准硒溶液适量（约相当于含硒20ug），滴加到3x3cm定量色谱滤纸上，吹干，折好后备用。
标准溶液，空白溶液，供试品溶液的制备 取本品粉末适量，精密称定（约相当于含硒20ug），用3x3cm定量色谱滤纸包好，另取硒对照纸和3x3cm的空白定量色谱滤纸，分别用1000mL氧气燃烧瓶，以硝酸溶液（1-30）25mL为吸收液，按“氧气燃烧法”进行有机破坏，开启瓶塞后，分别将吸收液移至100mL烧杯中，用水30mL分次洗涤燃烧瓶及铂丝。洗涤分别并入各烧杯中，既得供试品溶液，标准溶液，空白溶液。
测定法 将上诉三种溶液分别用浓氨溶液调PH至2.0±0.1值，各加盐酸羟胺（1-2）1mL，摇匀，精密加2，3-二氨基奈溶液5mL，摇匀，在水浴中加热5分钟，冷却后，分别移至分液漏斗，加少量的水，分次洗涤烧杯，洗涤液并入分液漏斗中，加水使总体积约70mL各加入环己烷10mL，强力振摇2分钟，放置，分层后弃去水层，分出环以烷层，用1g无水硫酸钠脱水，以《紫外-可见分光光度法》在378nm的波长处分别测定吸光度。
2.5 无机硒检测方法
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硒酵母0.5g），置于研体中，加乙醇溶液（乙醇300mL，水150mL，硝酸溶液（1-30）50mL）5mL，研磨，移入离心管中，研体用乙醇溶液15mL分3次洗涤，洗液并入离心管中，离心3分钟（3500转/分），倾出上清液，置50mL锥形瓶中，加入乙醇溶液20mL，领取乙醇溶液20mL，置50mL烧瓶中作为空白，分别在水浴中加热蒸发置近干，防冷，在加入混合酸（无硒硫酸3mL，70～72%高氯酸4mL）7mL，摇匀，加6.6%钼酸钠溶液3mL，置沙浴中加热，溶液变为清亮无色，继续加热，置浓烟冒出，溶液变为黄色，随后变为淡黄绿色时;停止加热，冷却后，移入烧杯中，各加入0.2mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液2mL，用浓氨溶液调PH值为2.0±0.1，各加盐酸羟胺（1-2）1mL，摇匀，精密加2，3-二氨基奈溶液5mL，摇匀，在水浴中加热5分钟，冷却后，分别移至分液漏斗，加少量的水，分次洗涤烧杯，洗涤液并入分液漏斗中，加水使总体积约70mL各加入环己烷10mL，强力振摇2分钟，放置，分层后弃去水层，分出环以烷层，用1g无水硫酸钠脱水，以《紫外-可见分光光度法》在378nm的波长处分别测定吸光度。
3 结束语
综合所述，在对硒酵母进行测定的过程中，可以利用催化吸光光度法对其进行总硒，在对硒的含量进行测定的过程中，相关人员可以采用对有机硒和无机硒含量进行测定的方法对其进行测定。在对其进行测定的过程中，可以采用半胱氡酸定性鉴别的方法对有机硒和无机硒进行鉴别，这种方法本身就有着易于操作等的特点，在医药领域硒酵母的应用范围才能得到扩大。
参考文献
[1]高先娟.紫外可见分光光度法检测硒酵母片中硒的含量[J].微量元素与健康研究，2014（6）.
[2]杨志明，李方实，江涛.阴极溶出伏安法测定硒酵母中微量硒[J].广东微量元素科学，2001，8（11）：62-65.
[3]高建忠，秦顺义，黄克和.氢化物发生-原子荧光光谱法测定富硒酵母中的有机硒和无机硒[J].分析科学学报，2006，22（2）.
[4]占峰，付志欢，林羽，et al.氢化物-原子荧光光谱法测定富硒酵母中有机硒和无机硒[J].饲料工业，2017（10）.
关键词：酵母;有机硒;无机硒
1 试验部分
1.1 主要仪器与试剂
Backman公司DU一7分光光度计1、2、3、4、5为5种不同含硒量的硒酵母在培养基中添加不同量的亚硒酸钠，接种酵母菌，在3O℃下培养48h而得。变色酸：0.03tool·L-1，称取变色酸1.0930g，定容至100ml。盐酸苯肼：0.03mol·L-1。称取0.4400g盐酸苯肼，定容至100ml。EDTA：0.02tool·L-1，称取EDTA钠盐0.7450g定容至100m|。氯酸钾：0.6mol·L-1，称取7.3500g氯酸钾。
1#、2#、3#、4#、5#为5种不同含硒量的硒酵母：在培养基中添加不同量的亚硒酸钠.接种酵母菌.在30°C下培养48h而得。
变色酸：0.03mol·L-1，称取变色酸1.0930g.定容至100ml。
盐酸苯肼：0.03mol·L-1，称取0.4400g盐酸苯肼，定容至100ml。
EDTA：0.02mol·L-1，称取EDTA钠盐0.7450g定容至100ml。
氯酸钾：0.6mol·L-1，称取7.3500g氯酸钾、定容至100ml。
HCI-KC1缓冲液：0.2tool·L，取浓盐酸2.50ml稀释至150ml;再取氯化钾2.2500g，定容至150ml，两者混匀。
亚硒酸标液：称取亚硒酸0.08167g，定容至500ml，然后再稀释500倍混合酸：浓硝酸400ml与高氯酸100ml，混匀。
1.2 分析方法
1.2.1 样品
消化称取硒酵母样品0.2g于锥形瓶中，加入混合酸lo～15ml，加热至发烟，待溶液变为淡黄色后，再加热2～3min，此时溶液变为无色，冷却后，定容，即可进行测定。
1.2.2 标准曲线绘制
分别取含硒0.2g·ml-1。的亚硒酸标准液，0，l，2，3，4，5ml于比色管中，加入EDTAlm1，缓冲液2m1，氯酸钾2ml，变色酸2ml，盐酸苯肼lml，加水至15ml，摇匀，在沸水浴中加热20rain，于冷水中冷却后.用lcm比色皿于520nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
2 结果与讨论
2.1 消化方法试验
本文用硝酸一高氯酸、去硒硫酸一高氯酸一钼酸铺的方法消化。硝酸一高氯酸方法比较费时一但测定结果与真实值基本接近.绝对误差为0.0054g-相对误差为0.87;去硒硫酸一高氯酸一铝酸钠方法比较简单、快速.但是测定结果高于真实值.可能是钼离子对测定结果有影响，其绝对误差为0.0293g.相对误差为6.40。为此采用硝酸一高氯酸的消化方法。
2.2 加热时间的影响
在试验过程中发现加热时间对删定结果影响较大，如果增加加热时闻，不但空白值增大.测定结果也偏高;缩短加热时间.则浓度怫度不明顯一重复性也不好。分别进行了加热15，20.25rain试验.结果表明，加热20mln时，测定结果最接近于真实值.重复性也最好。通过五组试验，测得其标准偏差为4.65，相对标准偏差为0.83。
2.3 可靠性检验
将亚硒酸标准样按测定硒酵母中总硒占量的方法进行测定.稚取亚硒酸标样0.2469g.测得其舍硒量为0.6122g，而其理论计算值为0.6176g，误差为00054g，相对误差为087，试验表明，该方法具有高的灵敏度和选择性，测定下限为0.25rig·m1，回收率为（100±6.5）。
2.4 有机硒-总硒的检测方法
标准硒的制备 取已知含量的亚硝酸钠适量，精密称定，加价硝酸溶液（1-30）制成1ul中含硒1.00ug的溶液或使用国家标准硒溶液。
硒对照纸的准备 精密量取标准硒溶液20ul滴加到3x3cm定量色谱滤纸上，吹干，折好后备用或精密量取国家标准硒溶液适量（约相当于含硒20ug），滴加到3x3cm定量色谱滤纸上，吹干，折好后备用。
标准溶液，空白溶液，供试品溶液的制备 取本品粉末适量，精密称定（约相当于含硒20ug），用3x3cm定量色谱滤纸包好，另取硒对照纸和3x3cm的空白定量色谱滤纸，分别用1000mL氧气燃烧瓶，以硝酸溶液（1-30）25mL为吸收液，按“氧气燃烧法”进行有机破坏，开启瓶塞后，分别将吸收液移至100mL烧杯中，用水30mL分次洗涤燃烧瓶及铂丝。洗涤分别并入各烧杯中，既得供试品溶液，标准溶液，空白溶液。
测定法 将上诉三种溶液分别用浓氨溶液调PH至2.0±0.1值，各加盐酸羟胺（1-2）1mL，摇匀，精密加2，3-二氨基奈溶液5mL，摇匀，在水浴中加热5分钟，冷却后，分别移至分液漏斗，加少量的水，分次洗涤烧杯，洗涤液并入分液漏斗中，加水使总体积约70mL各加入环己烷10mL，强力振摇2分钟，放置，分层后弃去水层，分出环以烷层，用1g无水硫酸钠脱水，以《紫外-可见分光光度法》在378nm的波长处分别测定吸光度。
2.5 无机硒检测方法
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硒酵母0.5g），置于研体中，加乙醇溶液（乙醇300mL，水150mL，硝酸溶液（1-30）50mL）5mL，研磨，移入离心管中，研体用乙醇溶液15mL分3次洗涤，洗液并入离心管中，离心3分钟（3500转/分），倾出上清液，置50mL锥形瓶中，加入乙醇溶液20mL，领取乙醇溶液20mL，置50mL烧瓶中作为空白，分别在水浴中加热蒸发置近干，防冷，在加入混合酸（无硒硫酸3mL，70～72%高氯酸4mL）7mL，摇匀，加6.6%钼酸钠溶液3mL，置沙浴中加热，溶液变为清亮无色，继续加热，置浓烟冒出，溶液变为黄色，随后变为淡黄绿色时;停止加热，冷却后，移入烧杯中，各加入0.2mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液2mL，用浓氨溶液调PH值为2.0±0.1，各加盐酸羟胺（1-2）1mL，摇匀，精密加2，3-二氨基奈溶液5mL，摇匀，在水浴中加热5分钟，冷却后，分别移至分液漏斗，加少量的水，分次洗涤烧杯，洗涤液并入分液漏斗中，加水使总体积约70mL各加入环己烷10mL，强力振摇2分钟，放置，分层后弃去水层，分出环以烷层，用1g无水硫酸钠脱水，以《紫外-可见分光光度法》在378nm的波长处分别测定吸光度。
3 结束语
综合所述，在对硒酵母进行测定的过程中，可以利用催化吸光光度法对其进行总硒，在对硒的含量进行测定的过程中，相关人员可以采用对有机硒和无机硒含量进行测定的方法对其进行测定。在对其进行测定的过程中，可以采用半胱氡酸定性鉴别的方法对有机硒和无机硒进行鉴别，这种方法本身就有着易于操作等的特点，在医药领域硒酵母的应用范围才能得到扩大。
参考文献
[1]高先娟.紫外可见分光光度法检测硒酵母片中硒的含量[J].微量元素与健康研究，2014（6）.
[2]杨志明，李方实，江涛.阴极溶出伏安法测定硒酵母中微量硒[J].广东微量元素科学，2001，8（11）：62-65.
[3]高建忠，秦顺义，黄克和.氢化物发生-原子荧光光谱法测定富硒酵母中的有机硒和无机硒[J].分析科学学报，2006，22（2）.
[4]占峰，付志欢，林羽，et al.氢化物-原子荧光光谱法测定富硒酵母中有机硒和无机硒[J].饲料工业，2017（10）.