间充质干细胞体外长期培养可以发生自发恶性转化,现机制未清,其可能与癌基因的激活、抑癌基因的失活有关。我们通过前期研究发现人类胚胎肌肉细胞长期培养可发生自发恶性转化,并获得6个永生化细胞系(来源于不同遗传背景)。实验目的研究人类胚胎肌肉源性自发恶性转化细胞系抑癌基因的改变。实验方法运用免疫组化、PCR、RT-PCR、DNA直接测序研究该类细胞系抑癌基因p16、p15、MTAP(甲硫氨酸磷酸化酶)和p53、p21基因的改变.实验结果对这6个恶性转化细胞系一些经典抑癌基因的研究发现:1.存在染色体9p21处的纯合性片段缺失,其中包括MTAP,p16和p15;2.p53存在广泛的DNA水平突变,对外显子7至8序列测序发现,其外显子7,8突变率分别为8%和14%,突变类型皆为点突变,内含子7突变程度更强,突变类型包括小片段缺失,插入及点突变,与现有公认的p53突变数据库比对发现其突变模式完全不同。且所有6个细胞系测序结果高度一致,提示这一突变模式具有强大的选择优势;3.p21存在DNA水平突变及逆转录水平的减少。结论通过以上研究可推论,抑癌基因的失活在人胚胎肌肉细胞体外自发恶性转化进程中具有重要作用。