【摘 要】
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目的:1.通过分析乳酸脱氢酶C4（lactic acid dehydrogenase C4,LDH-C4）在肝细胞癌中的表达情况,了解LDH-C4的表达情况与肝细胞癌患者的临床病理特征及其预后的关系。2.明确LDH-C4过表达对肝细胞癌细胞Bel-7402的细胞生物学行为能力的影响,并探讨相关分子机制。方法:1.基于高通量肝癌和癌旁组织芯片结果,采用免疫组化染色技术（IHC）检测肝细胞癌癌组织中L
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目的:1.通过分析乳酸脱氢酶C4（lactic acid dehydrogenase C4,LDH-C4）在肝细胞癌中的表达情况,了解LDH-C4的表达情况与肝细胞癌患者的临床病理特征及其预后的关系。2.明确LDH-C4过表达对肝细胞癌细胞Bel-7402的细胞生物学行为能力的影响,并探讨相关分子机制。方法:1.基于高通量肝癌和癌旁组织芯片结果,采用免疫组化染色技术（IHC）检测肝细胞癌癌组织中LDH-C4蛋白的表达水平,同时结合高通量组织芯片已建立的临床资料和随访数据库,分析LDH-C4表达情况与肝癌肿瘤组织T分期、临床分期、肿块大小等病理及临床的关系。2.荧光显微镜观察GV492-LDHC慢病毒感染后的Bel-7402肝细胞癌细胞中EGFP（enhanced green fluorescent protein,增强型绿色荧光蛋白）表达情况,筛选LDH-C4表达呈阳性的细胞系。通过RT-q PCR鉴定LDHC m RNA过表达的效果。通过CCK-8实验、划痕修复实验及Transwell小室等实验分别检测LDH-C4对肝细胞癌细胞Bel-7402在体外的增殖、迁移及侵袭能力的影响。3.基于建立的LDH-C4稳定过表达的Bel-7402细胞系基础上,对各组细胞中乳酸、丙酮酸等细胞能量代谢产物含量进行检测,同时检测各组肿瘤细胞中葡萄糖消耗水平,探究LDH-C4过表达对Bel-7402肝细胞癌细胞能量代谢的影响;通过Western blot实验检测AKT/mTOR信号通路中相关蛋白表达水平受LDH-C4过表达的影响。结果:1.肝细胞癌组织高通量芯片分析结果表明:肝细胞癌中的LDH-C4呈现高表达状态,主要表达于肝细胞癌细胞的细胞质中,且LDH-C4的表达水平与肝细胞癌患者的T分期、临床分期及肿块大小明显相关（P<0.05）;生存分析结果提示:LDH-C4高表达患者的预后较低表达者更差（P<0.05）。2.成功获得稳定过表达LDH-C4的Bel-7402细胞株;CCK-8实验、划痕修复实验及Transwell小室实验检测结果提示:LDH-C4过表达可提高Bel-7402肝细胞癌细胞在体外的迁移侵袭能力,但对生长增殖无明显影响。3.能量代谢实验结果显示:Bel-7402细胞中LDH-C4过表达可提高乳酸产生含量,降低丙酮酸含量,提高细胞对葡萄糖的利用;Western blot结果提示:LDH-C4过表达可上调AKT/mTOR信号通路中AKT蛋白及mTOR蛋白的表达。结论:1.肝细胞癌组织中LDH-C4呈现较高表达状态,与肝细胞癌患者的肿块大小、T分期以及临床分期呈现明显正相关;LDH-C4可作为肝细胞癌患者预后监测的一项重要参考指标。2.Bel-7402肝细胞癌细胞中LDH-C4过表达可促进该细胞在体外的迁移和侵袭能力。3.LDH-C4过表达可促进Bel-7402肝细胞癌细胞的能量代谢水平,并且可能与AKT/mTOR信号通路的激活有关。
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