本研究应用不同的成熟培养液和冷冻方法对牛卵泡卵母细胞进行体外成熟和冷冻保存，以期筛选出较有利于卵母细胞体外成熟、体外发育的培养液和冷冻方法。以屠宰场获取的牛卵巢为试验材料，抽吸法收集卵巢表面直径2—8mm卵泡中的卵丘卵母细胞复合体(COCs)，研究结果如下。 1．采用四孔培养板用400μL培养液(上覆灭菌矿物油)培养卵母细胞，其体外成熟率及发育率与微滴(100μL)培养的相应指标无显著差异(P>0.05)。 2．采用TCM199内添加10％发情牛血清和10％牛卵泡液培养牛卵母细胞，获得了与添加激素组类似的成熟率(64％ vs 62％)，受精后，发育率差异不显著(卵裂率为38.3％ vs 38.6％，桑椹胚囊胚发育率为21.3％ vs 23.1％)。 3．发情牛血清灭活与否对牛卵泡卵母细胞体外培养的效果无显著影响(成熟率为58.5％ vs 61.5％)，但血清不灭活，卵母细胞难以操作。 4．牛卵泡液添加前是否过滤显著影响牛卵泡卵母细胞的成熟率(38.3％ vs56.5％)，故采用将牛卵泡液不过滤直接加入到成熟培养液。 5．直径2—6mm卵泡内的COCs最适宜进行22—24h体外成熟培养，过大卵泡(大于6mm)对该培养时间不适宜，体外成熟率分别是62.6％和49.6％，差异显著(P<0.05)。 6．作为冷冻基础液，PBS和TCM199在程序冷冻法中冷冻效果后者优于前者(成熟率9.7％ vs 18.8％)，但在超快速冷冻和玻璃化冷冻中二者差异不显著(成熟率分别为12.9％、13.3％；17.0％、16.8％)。 7．作为冷冻保护剂，乙二醇的冷冻效果优于甘油。程序冷冻中，卵母细胞成熟率为15.9％ vs 11.9％；超快速冷冻中成熟率为18.3％ vs 11.7％。 8．冷冻方法和卵母细胞发育阶段对冷冻效果有明显影响。程序冷冻法、超快速冷冻法、玻璃化冷冻法冷冻卵母细胞解冻后的形态正常率分别为76.3％、71.1％、84.7％，体外成熟率分别为14.0％、14.9％、17.4％，受精率分别为17.2％、17.8％、21.3％，卵裂率分别为9.7％、13.4％、18.0％。玻璃化冷冻法冷冻效果显著优于其他二种方法(P<0.05)。GV期和体外成熟卵母细胞解冻后的受精率和卵裂率分别为10.6％、27.2％；6.4％、19.4％，后者冷冻效果显著优于前者(P<0.05)。