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目的意义：HPPCn(Hepatopoietin Cn)是一个我们实验室发现的再生肝脏的一种新的细胞生长因子，它主要来源于哺乳动物。在多种组织中广泛表达。作为一类多功能的核蛋白，它可以表达于肿瘤组织中，同时也表达于自我具有更新能力的细胞中和正常组织中，同时他在很多方面发挥了重要的作用，包括在蛋白质的降解、细胞骨架动力学、细胞之间的信号转导、和细胞的形态变化方面和其他许多生物过程中。在CRCC细胞中HIF-1α和HIF-2α的转录靶基因并不完全相同，并清楚定义了HIF-1α和HIF-2α的特异靶基因。多种癌基因如CyclinD1、TGF-α、VEGF等是HIF-2α的特异靶基因，而促凋亡基因BNIP3是HIF-1α的特异靶基因。而且HIF-1α和HIF-2α与不同的信号转导通路交联。HIF-1α的激活能够抑制c-Myc依赖的细胞增殖，而HIF-2α的作用则与之相反。除此以外，HIF-1α比HIF-2α对VHL缺失CRCC细胞中蛋白酶体的降解更敏感。CRCC的多血管特征常与HIF-2α上调密切相关，而CRCC中高表达HIF-1α患者的生存期要长于其他类型患者。因此，HIF，特别是HIF-2α可能在CRCC发展中发挥了更为重要的作用近年的研究发现HPPCn的表达和活性与肿瘤的生长和预后密切相关。HPPCn能够抑制多种化疗药物（Sorafinib，ADM，CDD，TSA）诱导的肝癌细胞凋亡，并能够通过调控miRNA表达促进肿瘤细胞的上皮-间质转化（EMT）以及血管内皮细胞的迁移，促进肿瘤的转移和浸润。转基因小鼠的肝癌诱发实验显示HPPCn能够在诱导早期增加原癌基因c-myc的表达，并显著增加肿瘤的肺转移率。肝癌细胞尾静脉注射实验显示HPPCn高表达能够增加肝癌细胞的肺转移和肿瘤中血管的数量。那么HPPCn和HIF之间有怎样的关系？肾脏透明细胞癌的发生、发展过程中与HPPCn之间会有着什么样的关系呢？围绕上述问题，本实验目的是研究HPPCn调控HIF-2a促进肾癌细胞生长转移的作用和机制。为此做了如下的研究工作。方法:应用Western blot检测肾脏透明细胞癌标本中HPPCn表达，应用免疫组织化学染色研究肾癌病理切片中的表达；通过慢病毒载体构建方法，构建干涉HPPCn的慢病毒载体；应用Western blot检测HPPCn对HIF-2a表达的影响，通过干涉肿瘤细胞的HPPCn表达，应用MTS检测细胞的增值，划痕实验、Transwell实验验证细胞的迁移能力。结果:我们发现在肾透明细胞癌组织中的表达显著高于正常肾组织。23例临床肾癌组织免疫组织化学染色分析显示HPPCn在肾脏透明细胞癌中的表达显著高于癌旁组织和正常肾脏组织。同时我们通过慢病毒载体构建技术构建了PLKO.1/RFP/shRNA，并将其包装成慢病毒，它可以有效的干涉细胞内的HPPCn的表达，干涉效率在蛋白质水平和mRNA水平上均大于81%，病毒感染细胞后我们计算获得786-0细胞的嘌呤霉素筛选的最佳浓度，经过加药筛选处理后，我们经过克隆扩大培养，获得了稳定干涉HPPCn的786-0细胞，慢病毒的获取和稳定细胞的筛选为下一步阐述HPPCn在肾脏透明细胞癌中的作用奠定了基础。随后，我们验证了HPPCn蛋白对肾脏透明细胞癌中HIF2a表达和对肾透明细胞癌细胞生物特性的影响。HPPCn能够上调肾脏透明细胞癌中HIF2a的表达。我们用稳定干涉HPPCn的786-0细胞来进行实验，证明干涉786-0细胞内HPPCn表达后，细胞的增殖能力变慢，迁移能力变弱，细胞的凋亡率增加，同时还增强了细胞对Sorafinib的敏感性。基于以上的研究，我们得出结论HPPCn在肾脏透明细胞癌的生物特性方面有重要的作用，HIF2a接受HPPCn的调节促进肿瘤细胞的增殖，迁移、活化和转移等生物过程，该研究将为肾脏透明细胞癌的分子靶向治疗提供新的理论支持。