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背景和目的:胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是最常见的中枢神经系统原发性实体瘤,其WHO分级较高,难以彻底治愈,严重影响临床预后,5年存活率极低。GBM的治疗手段包括外科切除、放疗、化疗,近年分子靶向治疗也广泛应用于临床,但治疗仍未达到满意的预期。长链非编码RNA(long noncoding RNA,Lnc RNA)的功能复杂多样,在肿瘤发生与进展中的作用也不尽相同。随着研究不断的更新,Lnc RNA肝癌高表达转录本(highly up-regluated in 1iver cancer,HULC)在肝癌、GBM、胰腺癌等肿瘤中具有促癌作用,但具体的调控机制仍需进一步探索。Lnc RNA HULC已被证实在GBM中可以通过PI3K/AKT信号通路发挥促癌作用,而人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)在该通路中发挥重要作用。PTEN的失活可能导致正常细胞发生恶变。相反,PTEN基因的激活可以抑制PI3K/AKT信号通路的促癌作用,该通路的激活可以促进肿瘤的增殖和侵袭活性。基因表达的调控不仅可以通过改变脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)的序列,也可以在表观遗传学、转录、翻译等多个层面进行调控。DNA甲基化、组蛋白乙酰化,都可以在一定程度上影响基因在m RNA水平上的表达情况,相关药物在临床上已得到应用,但其在实体肿瘤当中是否能发挥抗肿瘤疗效仍有争议。PTEN基因的DNA甲基化可能降低PTEN的表达,对PI3K/AKT信号通路的抑制减弱,增强肿瘤增殖和侵袭。本研究通过慢病毒转染HULC的GBM细胞株U251,探讨Lnc RNA HULC影响PTEN启动子甲基化和组蛋白乙酰化水平,促进GBM增殖和侵袭的作用。方法:1.GBM细胞株U251稳定转染HULC,分为过表达组、vec空白对照组;2.实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测各组细胞PTEN、HULC的相对表达量;3.亚硫酸氢盐处理后测序(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)技术检测各组细胞PTEN启动子甲基化水平;4.蛋白免疫印迹(Western Blotting,WB)检测各组细胞PTEN蛋白、组蛋白H3/H4、乙酰化组蛋白H3/H4的表达水平;5.克隆形成实验、CCK8实验、划痕愈合实验和transwell实验分别检测各组细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果:1.q RT-PCR结果表明U251细胞株中Lnc RNA HULC稳定转染后可以显著地提高Lnc RNA HULC的表达水平,较vec空白对照组有明显差异,而Lnc RNA HULC高表达时,PTEN的表达较对照组显著降低,证明了Lnc RNA HULC转染效率可靠,并可在m RNA水平上降低PTEN的表达;2.BSP技术结果提示Lnc RNA HULC组PTEN启动子甲基化水平较对照组低,表明PTEN在m RNA水平上的表达差异可能与其启动子甲基化水平有关,Lnc RNA HULC可降低PTEN启动子甲基化水平;3.WB结果表明Lnc RNA HULC组中PTEN的表达显著低于对照组,提示Lnc RNA HULC可在蛋白水平上降低PTEN的表达,Lnc RNA HULC组中组蛋白H3/H4与对照组无差异,而乙酰化组蛋白H3/H4的表达水平较对照组降低;4.克隆形成实验、CCK8实验、划痕愈合实验、transwell实验结果提示Lnc RNA HULC组细胞的增殖、迁移、侵袭能力较vec组显著提高,分别验证了Lnc RNA HULC可以促进GBM的增殖、迁移、侵袭。结论:Lnc RNA HULC降低PTEN启动子甲基化和组蛋白乙酰化水平,抑制PTEN表达,促进GBM的增殖和侵袭。