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已有报道证实WRKY转录因子在植物应答各种生物胁迫与非生物胁迫中起到了重要的调节作用,分离植物WRKY家族的不同成员并鉴定其功能是阐明植物抗逆分子机制的重要途径。本实验室已从经UV诱导的cDNA文库中分离获得了一个辣椒CaWRKY3基因的全长cDNA,含有编码378个氨基酸残基的开放读码框,分子量为42KDa,属于WRKY转录因子家族中的第Ⅰ类,其表达产物定位于细胞核,具有转录因子的基本特征,定名为CaWRKY3。本研究在此基础上对CaWRKY3进行荧光定量PCR分析,以期确定该基因在不同胁迫下的表达模式,并利用T2代烟草转基因植株进行了CaWRKY3超表达对转基因烟草的各种性状的影响分析,探讨CaWRKY3在辣椒抗逆防卫反应机制中的作用,并构建了CaWRKY3基因的原核表达载体,为进一步剖析CaWRKY3基因的下游网络奠定基础。主要结果如下:1.通过荧光定量PCR技术分析CaWRKY3基因在经胁迫处理的辣椒幼苗中的表达。研究发现CaWRKY3在青枯病病原菌侵染作用下表达量相对下调,而在低温和机械损伤作用下其表达量有所增加,在外源激素SA,ET作用下相对下调。2.利用T2代烟草转基因植株进行了CaWRKY3超表达对转基因烟草的各种性状的影响分析,研究发现在青枯病原菌侵染中CaWRKY3转基因植株较野生型易感病; CaWRKY3转基因植株较野生型对外源ET处理更敏感; CaWRKY3转基因植株较野生型对外源JA处理更具有抗性;在NaCl胁迫下,CaWRKY3转基因植株较野生型健康。上述结果暗示该基因可能在对病原菌生物胁迫中起负调控作用,但可能参与盐胁迫等非生物逆境的抗性调节。3.构建CaWRKY3基因的原核表达载体pET32a-CaWRKY3,实现了目的基因在大肠杆菌BL21菌株中大量表达,诱导表达的条件是:20℃,1.0mM IPTG,诱导表达20hr,表达蛋白的分子量约62KDa;采用Ni2+柱亲和层析法有效纯化原核表达CaWRKY3蛋白。CaWRKY3原核表达产物的获得为剖析CaWRKY3下游网络和制备抗体等奠定了基础。上述研究初步确定了CaWRKY3基因的功能及表达模式,为后续开展辣椒遗传改良研究奠定基础。