家蚕第14连锁群4个标记基因的SSR分子标记定位研究

来源 :西南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lbwang2009
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家蚕作为鳞翅目的代表昆虫,又是遗传学研究的极好材料。在数千年的养蚕历史中,因自然选择和人工诱发,有着丰富的遗传突变。家蚕连锁遗传图谱研究历经百年,已将300多个突变基因定位在分布于28个连锁群的220多个基因位点上。随着DNA分子标记技术的发展和在家蚕研究中的应用,家蚕分子连锁图谱研究取得丰硕成果,先后构建了RFLP、RAPD、AFLP、SSR、SNP分子标记图谱。但是家蚕经典连锁图与分子标记连锁图之间仍然处于孤立的状态,使这些成果的应用受到限制。因此,家蚕分子连锁图谱和经典遗传图谱的整合成为目前家蚕遗传学的重要课题和研究热点。家蚕SSR分子连锁图的发表以及SSR分子标记技术的诸多优点为家蚕分子连锁图谱和经典遗传图谱的整合创造了成熟的条件。本研究利用家蚕SSR分子连锁图的分子标记对经典遗传图谱第14连锁群的4个标记基因U、Nd-s、Di、oa进行了定位研究,研究内容和结果如下:(1)所采用的作图群体是回交群体:以F1雌同交隐形亲本的同交群体(BC1F)和以F1雄同交隐形亲本的同交群体(BC1M)。BC1F群体用于标记的筛选与连锁关系的确定,BC1M群体用于对标记进行基因型分析,以计算标记基因间与SSR标记间的遗传重组率,确定它们之间的遗传距离。配制作图群体的材料:选用西南大学家蚕基因资源库的基因定位系统17-141U·Nd-s和近交系“大造”配制U和Nd-s基因的连锁分析组合和定位分析组合:选用17-142oa和09-500 Di配制Di和oa基因的连锁分析组合利定位分析组合。(2)用与家蚕SSR连锁图谱对应于14连锁群的26对SSR引物住亲本17-141 U·Nd-s和“大造”之间进行多态性筛选,找到了9对在两个亲本间表现多态性的引物,再用这9对引物对连锁分析组合BC1F群体的22个个体(11个表现丝胶茧性状的个体和11个正常个体)和2个亲本,共24个个体基因组DNA进行PCR扩增和PAGE电泳检测,筛选到4对与标记基因U和Nd-s连锁的SSR标记:S1401、S1411、S1419、S1426。用这4对SSR标记对U和Nd-s突变基因的定位分析组合BC1M群体的110个个体基因组DNA进行SSR-PCR分析,经过数据统计和分析,利用作图软件得到U、Nd-s标记基因和与它们连锁的4个SSR标记的连锁图,该连锁图总图距为50.4cM,与U基因最近的标记是S1411,距U基因0.9cM,距离Nd-s最近的标记是S1419,距Nd-s基因0.0cM。(3)同样用这26对SSR引物在杂交组合的亲本17-142 oa和09-500 Di间进行多态筛选,得到8对在两个亲本间表现多态性的标记。通过用这8对SSR标记在BC1F群体中进行连锁检测,也找到了4对与标记基因Di和oa连锁的标记:S1414、S1418、S1419、S1926(其中有两个标记S1419和S1426也和标记基因U、Nd-s连锁)。用这4对标记对Di和oa的定位分析组合BC1M群体的145个个体基因组DNA进行SSR-PCR分析,经过数据统计和分析,利用作图软件得到Di和oa标记基因和与它们连锁的4个SSR标记的连锁图,该连锁图总图距为55.8cM,距离oa最近的标记是S1414,距oa基因13.1cM。(4)利用作图软件对两次实验得到的两张连锁图进行整合,将4个标记基因和与它们连锁的6个SSR标记整合在一张连锁图谱上,其中SSR标记S1411与标记基因U图距为0.9cM,SSR标记S1419与标记基因Nd-s的图距为0.6cM。这张整合图谱上4个基因之间的排列顺序与经典连锁图谱14连锁群完全一致,遗传距离也基本一致。我们的研究结果表明,完全可以通过多次实验,全面整合家蚕经典连锁图和分子连锁图的各连锁群。
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