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目的检测子宫内膜癌细胞雌、孕激素受体基因亚型启动子区甲基化状态及去甲基化药物对雌、孕激素受体表达的影响,探讨子宫内膜癌ER、PR表达下调与其基因异常甲基化的关系及逆转ER、PR基因高甲基化对子宫内膜癌细胞增殖与凋亡的影响。方法(1)甲基化特异性PCR (Methylation Specific-PCR)法检测子宫内膜癌HEC-1-B和Ishikawa细胞中ERα(A、B、C)、ERβ、PRA、PRB基因甲基化及应用去甲基化试剂5-氮-2’-脱氧胞苷(ADC)后HEC-1-B和Ishikawa细胞ER、PR各亚型甲基化转变。(2)应用免疫印迹(Western-Blot)法检测ADC作用前后细胞中ER、PR蛋白表达变化。(3)在Hec-1-B和Ishikawa细胞中加入终浓度为2μg/ml的ADC、10-8~10-5mol/L醋酸甲地孕酮(MA)及同时加入ADC(2μg/ml)与10-8~10-5mol/L MA,继续培养72h,应用MTT法检测细胞增殖抑制率;吖啶橙-溴化乙锭(AO/EB)染色观察ADC、MA、ADC+MA各组细胞凋亡情况。结果(1)Hec-1-B和Ishikawa细胞中仅ERα-C、PRB基因启动子区高甲基化。(2)ADC可逆转HEC-1-B和Ishikawa细胞中ERα-C、PRB基因启动子区高甲基化,并增强ERα、PRB蛋白的表达。(3)ADC逆转ER、PR基因启动子区高甲基化后,可恢复MA对子宫内膜癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,细胞增殖抑制效应随MA浓度增高而增强, Hec-1-B细胞中ADC组与ADC+MA组细胞数目减少,胞质固缩,体积变小。结论子宫内膜癌HEC-1-B和Ishikawa细胞中存在ERα-C、PRB启动子区高甲基化,并且与ERα、PRB蛋白表达下调或沉默有关。 ER、PR基因启动子区高甲基化与ERα、PRB蛋白的低表达均可通过去甲基化药物作用逆转和恢复。MA对恢复ER、PR表达后的子宫内膜癌细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用。