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目的：本课题采用RNA干扰技术靶向沉默Aurora-A基因，通过体内、体外实验观察对肺腺癌细胞株H1299生物学行为的影响并探讨其相关机制，为临床治疗研究提供实验依据。方法：首先构建针对Aurora-A基因的慢病毒LV-shRNA载体，然后转染H1299细胞，同时以转染阴性载体H1299为对照。通过观察荧光显微镜下绿色荧光蛋白表达情况来确定转染效率，采用荧光实时定量PCR和RT-PCR检测Aurora-A基因在mRNA水平表达的变化，应用Western blotting技术检测Aurora-A基因在蛋白水平表达的变化，以明确RNAi的抑制率。再采用Western blotting技术从蛋白质水平检测Aurora-A、caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax表达的变化，通过Cellomics分析仪、流式细胞仪检测H1299细胞在RNA干扰后增殖、凋亡和细胞周期的变化，分析沉默Aurora-A基因对这些蛋白表达水平以及细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。将稳定沉默Aurora-A的H1299细胞与对照细胞皮下接种裸鼠，观察接种后肿瘤生长情况，免疫组化检测移植瘤细胞中Aurora-A蛋白表达情况。结果：针对Aurora-A基因的RNAi慢病毒表达载体构建成功， PCR和DNA测序鉴定实验表明插入位点与干扰片断的碱基序列完全正确；在293T细胞中进行慢病毒包装，获得高滴度上清液；通过重组慢病毒载体将Aurora-A shRNA转导入H1299细胞中，转染效率超过70%；构建的重组慢病毒LV-Aurora-A无论在mRNA水平还是在蛋白水平均能抑制Aurora-A基因的表达；RNAi对Aurora-A基因敲减效率约为70%。利用RNAi技术沉默Aurora-A基因表达可在蛋白水平上调caspase-3、caspase-9和Bax的表达，下调Bcl-2的表达； Aurora-A基因表达抑制可影响H1299细胞周期的进程，使其发生G2/M期阻滞； Aurora-A基因表达下调可抑制H1299细胞增殖，减缓其生长速度；抑制Aurora-A基因表达可诱导H1299细胞凋亡。Aurora-A基因沉默组的裸鼠肿瘤体生长明显受到抑制，肿瘤生长速度慢于其他两组，肿瘤的平均体积及重量明显减低；Aurora-A基因沉默组的裸鼠移植瘤显微镜下观察（HE染色）可见凋亡小体；免疫组化显示：Aurora-A基因沉默组裸鼠移植瘤细胞中Aurora-A蛋白表达明显减低。体内实验显示，Aurora-A沉默的H1299细胞在裸鼠体内成瘤能力降低(P<0.01)。结论:采用shRNA慢病毒载体成功构建了Aurora-A基因稳定干扰的H1299细胞系；慢病毒介导的Aurora-A基因稳定干扰能在体外促进H1299细胞凋亡、抑制细胞生长；Aurora-A基因稳定干扰能抑制H1299裸鼠移植瘤生长，诱导裸鼠移植瘤细胞凋亡；Aurora-A有望成为肺腺癌辅助基因治疗的潜在靶点。