Rab18通过PPARγ下调PLIN2减少巨噬细胞脂质蓄积

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【背景与目的】本课题组前期研究发现,在THP‐1巨噬细胞中,高表达脂肪分化相关蛋白PLIN2能够促进脂质蓄积加速动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的发生发展,但其具体发生机制尚不完全明了。因此,本研究的目的是为了阐明小GTP结合蛋白Rab18、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptors,PPARγ)与PLIN2的关系,探讨PLIN2促进THP‐1人源性巨噬细胞脂质蓄积的机制。【方法】首先,将50μg/mL Ox‐LDL与THP‐1巨噬细胞共孵育,在不同的时间点利用Western blot检测细胞内Rab18、PPARγ及PLIN2表达情况,同时油红O染色法观察细胞内脂质蓄积的变化;然后,将质粒Rab18(WT)、Rab18(Q67L)和Rab18(S22N)分别转染THP‐1巨噬细胞,制备野生型Rab18细胞、高活型Rab18细胞和低活型Rab18细胞,并通过免疫荧光技术和Western blot检测质粒转染情况。结果显示转染成功后,我们将50μg/mL Ox‐LDL与各转染细胞共孵育24小时,再利用Western blot检测细胞内PPARγ及PLIN2的变化,油红O染色法观察细胞内脂质蓄积情况;细胞免疫荧光观察Rab18与PPARγ是否存在共定位及Rab18对PPARγ核转位的影响。最后,分别用PPARγ激动剂和抑制剂预处理高活型Rab18细胞2小时,再用50μg/mL Ox‐LDL处理该细胞,通过Western blot及细胞免疫荧光检测巨噬细胞内PPARγ和PLIN2表达变化。【结果】THP‐1巨噬细胞内Rab18、PPARγ及PLIN2表达量在24h内随着50μg/mL Ox‐LDL处理时间的延长而增加,且脂质蓄积也随时间延长而增多。与对照组相比,各转染组Rab18均高表达,但组间无差异性表达。然后给予Ox‐LDL处理后结果显示,野生型Rab18细胞和高活型Rab18细胞荷脂后,细胞内PPARγ、PLIN2的表达较对照组显著下调,并且细胞内脂质蓄积明显减少;而低活型Rab18细胞中,这两种蛋白的含量以及细胞内脂质蓄积未见明显变化;用免疫荧光观察,Rab18与PPARγ在荷脂巨噬细胞中确实存在共定位情况,且高活型Rab18细胞中PPARγ表达及核转位明显减少;在高活型Rab18细胞中加入PPARγ激动剂可以显著增加细胞内PLIN2的表达及脂质蓄积,逆转了Rab18对PLIN2及脂质蓄积的抑制作用,而加入PPARγ抑制剂后,细胞内PLIN2表达及脂质蓄积则明显减少,且增强了Rab18对PLIN2及脂质蓄积的抑制作用,说明Rab18通过PPARγ下调PLIN2表达及脂质蓄积。【结论】Rab18通过PPARγ下调PLIN2表达,抑制巨噬细胞脂质蓄积。
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