论文部分内容阅读
目的辣木(Moringa oleifera.Lam))是一种多年生的热带亚热带落叶植物,它的叶子中有丰富的营养物质和功效成分,而黄酮是主要功效成分之一。辣木叶黄酮具有预防高血压、高血脂,抗氧化、提高免疫力等作用,目前为止,辣木叶黄酮抗疲劳功效文献中尚未见报道。本课题主要是以辣木叶为原料,分离纯化出黄酮,研究其抗疲劳活性及分子机制,为辣木叶黄酮在功能食品方面的应用提供理论支撑。方法1、通过AB-8、NKA-Ⅱ、D101、HPD600、S-8、ADS-7、X-5和DM301八种大孔树脂对辣木叶黄酮粗提物的静态吸附和解吸效果的考察,筛选出一种对其分离纯化效果最理想的树脂,并优化分离纯化条件;比较纯化前后提取物中黄酮含量;并采用HPLC对辣木叶黄酮纯化物的黄酮成分进行定性定量分析。2、探究辣木叶黄酮纯化物抗疲劳活性。将48只雄性昆明小鼠分为正常对照(NC)组、辣木叶黄酮粗提物(MLCE)组和辣木叶黄酮纯化物(MLFE)组。NC组灌胃纯水,MLCE组和MLFE组分别灌胃辣木叶黄酮粗提物溶液(340 mg/kg·bw)和辣木叶黄酮纯化物溶液(75 mg/kg·bw),灌胃体积0.5 m L,D15负重游泳,记录力竭游泳时间;另将48只小鼠分为安静对照(QC)组、游泳对照(SC)组和辣木叶黄酮纯化物(MLFE)组,QC组、SC组灌胃纯水,MLFE组灌胃辣木叶黄酮纯化物溶液,灌胃体积0.5 m L,D15,SC组和MLFE组进行非负重游泳90 min后取血液、肝脏和后腿肌肉,QC组灌胃后直接取血后处死,取肝脏和后腿肌肉,用于相关生化指标的检测。3、采用石蜡包埋切片技术制备病理切片;利用q-PCR、ELISA等实验技术探究应激及干预后肌肉中GCK/PEPCK,Nrf-2/HO-1相关基因m RNA和蛋白水平的表达。结果1、NKA-Ⅱ型大孔树脂对辣木叶黄酮的吸附解吸性能最优,分离纯化的最佳工艺条件:环境温度25℃,上样流速1.5 BV/h,上样液浓度1.12 mg/m L,上样量5BV,乙醇浓度70%,洗脱流速2.5 BV/h,洗脱液体积11BV。经树脂纯化后,样品溶液中黄酮含量由12.36%提高到54.66%。2、通过小鼠力竭游泳实验模型发现,MLFE显著延长了小鼠的力竭游泳时间,其效果略优于MLCE;生化指标测定结果显示,MLFE还升高了游泳后小鼠血糖,降低了血清中LA、BUN、MDA水平;维持运动过程中肌肝糖原水平,提高血清和组织中抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)、ATP酶的活性及NEFA的含量。3、与SC组相比,MLFE组的小鼠肌肉中GCK、PEPCK、Nrf-2、HO-1基因m RNA和蛋白表达上调。结论1、利用NKA-Ⅱ型大孔树脂分离纯化辣木叶黄酮,黄酮纯度得到较大的提高,由12.36%提高到54.66%,证实了纯化工艺条件切实可行。2、在小鼠游泳实验中,MLFE能增强小鼠的游泳耐力;升高血糖,维持糖原水平,减少代谢产物的堆积,提高ATP酶活性,促进机体的能量代谢速度;增加NEFA含量,改变能量代谢方式;提高各种抗氧化酶活性,维持体内氧化抗氧化系统的平衡。辣木叶黄酮是通过调节能量代谢,减少代谢产物积累、提高抗氧化能力等途径实现抗疲劳作用的。3、辣木叶黄酮可以通过GCK/PEPCK、Nrf-2/HO-1信号通路,调节能量代谢和抗氧化能力起到抗疲劳作用。