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本研究以恩诺沙星为主药,加入适量的助悬剂、润湿剂、絮凝剂等,采用正交设计筛选配方,以分散法研制出稳定的恩诺沙星混悬剂,并对该制剂进行稳定性及其在猪体内的药动学和残留研究。
采用强光照射试验,加速试验和长期试验对恩诺沙星混悬剂进行稳定性研究。样品中恩诺沙星含量采用反相高效液相色谱法检测,试验结果表明样品的含量、外观性状及pH值均未见明显变化,符合药剂学中规定的混悬剂要求。
选用10头健康杜洛克×大白×长白三元杂交猪,采用随机交叉试验,进行恩诺沙星混悬剂和恩诺沙星溶液经猪内服的药动学试验,给药剂量均为lOmg/kg b.w.。按设计时间点前腔静脉采血,肝素抗凝分离血浆。高效液相色潜检测血浆中恩诺沙星的浓度,色谱柱为phenomenex luna-C18(2)(4.6mmx250mm,5μm),流动相为0.05mol/L磷酸溶液一乙睛(82:18,v:v),流速为0.8mL/min,荧光检测器激发波长为280nm,发射波长为450nm。方法在O.02~2μg/mL浓度范围内有良好的线性关系,回收率达到90%以上。采用3P97药代动力学软件进行处理药一时数据,得出相关药物动力学参数。恩诺沙星混悬剂和溶液内服给药后在猪体内均符合一级吸收一室模型,主要动力学参数分别为:Kа,0.35±0.22h1和2.05±1.35h-1;ke,0.089±0.017h-1和0.12±0.045h-1;t1/2ka,2.70±l.48h和0.45±0.24h;tl/2ke,8.06±1.54h和6.14±1.89h;tmax,6.00±1.79h和1.70±0.50h;Cmax,1.37±0.066μg/mL和2.3l±0.38μg/mL;AUC,27.40±5.03mg.L-l.h和24.42±4.42mgL-lh。t检验表明,两种制剂ka、tl/2Ka、tmax和Cmax差异极显著(P<0.01),tl/2Ke。差异显著(P<0.05),表明恩诺沙星混悬剂在猪体内达峰时间延迟、峰浓度降低、消除半衰期延长,具有一定的缓释作用。
选用42头健康杜洛克×大白×长白三元杂交猪,空白对照组2头,其余40头每头猪每天按10mg/kg b.w.的剂量灌服恩诺沙星混悬剂,连续给药3天,并在停药后第0、l、3、5、7、10、14和21天各宰杀5头猪,分别采取臀部脂肪、肌肉、肝脏和肾脏共4种样品。样品(脂肪、肌肉、肝脏、肾脏)经磷酸盐缓冲液提取,Cl8固相萃取柱净化,高效液相色谱检测各组织中恩诺沙星和环丙沙星的残留量,色谱条件同药动学中血浆分析方法。恩诺沙星和环丙沙星的标准曲线在O.02~2μg/g浓度范围内,相关系数均大于0.9990,线性关系良好。猪各组织中的恩诺沙星和环丙沙星在1/2MRL、MRL、2MRL三个添加水平的回收率分别在68.57~84.99%和67.45-86.13%,批内变异系数分别在2.7~9.8%和3.3~8.2%,批间变异系数分别在5.3~10.8%和5.2~10.2%。停药后第0天,脂肪、肌肉、肝脏和肾脏组织中的平均药物浓度(恩诺沙星+环丙沙星)分别为511.86μg/kg、2209.69μg/kg、2597.01μg/kg、4132.72μg/kg;停药后第3天,脂肪和肌肉组织中均未测出药物残留(低于定量限20μg/kg);停药后第5天,肝脏和肾脏样品中均未测出药物残留。结果表明,恩诺沙星在猪组织中的消除速度快,恩诺沙星在猪组织中的残留分布不均,在肾脏中含量最高,在脂肪中含量最少。采用WTl.4软件制定的统计方法来处理猪组织中药物浓度一时间数据,计算各组织的休药期,肝脏休药期为3.01d,肾脏休药期为3.64d,猪以10mg/kg b.w.的剂量口服恩诺沙星混悬剂,休药期为4天。