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目的:建立家族性甲状腺乳头状癌(FPTC)永生化细胞系,为研究家族性非髓样甲状腺癌(FNMTC)提供新的途径;建立甲状旁腺(Parathyroid Gland)细胞系并进行微囊化,为甲状旁腺移植提供新的途径。方法:选取FPTC患者的肿瘤标本,采用消化法分离原代细胞;使用改良的DMEM/F12培养基,添加促甲状腺激素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、表皮细胞生长因子(EGF)及氢化可的松等因子进行培养;在原代细胞早期分两种方式导入外源基因猿猴病毒40大T抗原(SV40T)/端粒酶逆转录酶(TERT)用于诱导永生化;利用RT-PCR检测甲状腺过氧化物酶(TPO)、甲状腺球蛋白(TG)、促甲状腺激素受体(TSHR)、钠/碘共同转运体(NIS)等基因的表达,同时利用免疫荧光技术检测TPO及磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)蛋白的表达;提取该患者外周血DNA,进行突变基因的检测;提取细胞及肿瘤组织基因组PCR扩增后测序,进行突变基因的检测。选取甲状旁腺腺瘤患者的肿瘤标本,采用消化法分离细胞;使用RPMI 1640培养基进行培养;待细胞稳定传代后,进行微囊化,观察细胞生长情况及微囊的稳定性;培养中多次检测甲状旁腺激素(PTH)等因子的水平。结果:分离的FPTC原代细胞呈梭形或不规则多角形贴壁生长;细胞生长6个月,转染SV40T组(标记为FPTC-S)传代至p26,FPTC细胞传代至p23,转染SV40T+TERT组(标记为FPTC-ST)传代至p19,细胞增殖能力较好;FPTC-S与FPTC-ST细胞均能够在基因水平稳定表达TPO、TG与TSHR;患者外周血中存在MLH1 R217C胚系突变;原代细胞及部分肿瘤组织中存在BRAF V600E突变;原代细胞及永生化的细胞系中均存在MLH1 R217C基因突变。分离的甲状旁腺腺瘤原代细胞贴壁生长,呈两种形态,一种为圆形细胞,倒置显微镜下可见黄色荧光;另一种为短梭形细胞,散在分布于圆形细胞中,其形态分别与甲状旁腺的主细胞及嗜酸细胞相近,细胞可以稳定传代至p15代;微囊化后,细胞可正常生长,并且没有破坏微囊结构。结论:本研究初步建立了FPTC永生化细胞系,且该细胞系中存在MLH1 R217C及BRAF V600E突变,该细胞系将为研究以上突变及其相互作用关系提供研究模型;同时,本研究初步探索了甲状旁腺腺瘤组织的分离及培养方法,并进行了微囊化实验,为甲状旁腺移植提供了新的研究方法。