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研究背景及目的大量研究显示,孕期维生素D缺乏与不良妊娠结局之间存在一定的相关性。同时,也有部分研究探讨了孕期维生素D补充对胎儿发育的影响,但最终结论却不统一。因此,本研究的主要目的是为了探讨孕期不同剂量维生素D补充对胎儿发育的影响。方法本研究主要由三部分组成。第一部分:研究孕期不同剂量胆钙化醇补充对胎盘和胎子发育的影响。将孕鼠随机分成四个组,全孕期以灌胃的方式分别给予不同剂量的胆钙化醇(0、2,000、10,000、40,000 IU/kg/day)处理。于GD18早晨剖杀孕鼠,观察并记录不同组别间每窝的活胎、死胎、吸收胎以及着床数。测量并记录存活胎子的体重和顶臀长以及其所对应的胎盘重量和胎盘直径。同时,留取母体血清用于检测母体中25-(OH)D的含量;留取存活胎仔所对应的胎盘组织,置于预冷的4%多聚甲醛中用于后续组织病理学实验的检测。第二部分:探讨孕期高剂量胆钙化醇补充对胎盘增殖和上皮间质转化的影响。将孕鼠随机分成两个组,从GD 0开始每天早晨以灌胃的方式分别给予孕鼠不同剂量的胆钙化醇(0和40,000 IU/kg/day)处理。一部分孕鼠(N=6)于GD 9早晨剖杀。留取所有胎盘组织,做好标记存放于-80°C冰箱中,用于后续相关分子指标m RNA和蛋白表达水平的检测。剩余孕鼠(N=6)按照上述方式继续处理,于GD 15早晨剖杀。一部分胎盘组织置于预冷的4%多聚甲醛中用于增殖相关指标的检测,剩余胎盘组织做好标记存放于-80°C冰箱用于后续相关指标m RNA表达水平的检测。第三部分:评估高剂量骨化三醇处理对人正常滋养细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭能力的影响。用500 nmol/L骨化三醇处理HTR-8/SVneo,采用细胞划痕和Transwell实验检测理HTR-8/SVneo细胞的迁移和侵袭能力。结果动物实验结果显示,尽管孕期低剂量胆钙化醇补充是相对安全的,但高剂量胆钙化醇补充组与对照相比胎仔体重显著下降(1.16±0.07 g vs 1.39±0.02 g,P=0.002),顶臀长与对照相比也明显降低(20.87±2.24 mm vs 23.35±0.98 mm,P=0.004)。高剂量组小鼠胎盘重量与对照相比呈明显下降趋势(0.09±0.01 g vs0.10±0.02 g,P=0.051),胎盘迷路层厚度与对照组相比显著下降(1.04±0.08 mm vs 1.34±0.077 mm,P=0.006)。同时,在高剂量胆钙化醇补充组的小鼠胎盘迷路层与滋养层的交界区观察到明显钙化灶。该研究进一步检测了胎盘组织中增殖相关指标Ki67的表达,发现孕期高剂量胆钙化醇补充组小鼠胎盘迷路层Ki67阳性细胞与对照组相比明显减少(8.25%±1.95%vs 23.07%±2.35%,P=0.004)。除此之外,孕期高剂量胆钙化醇补充显著下调小鼠胎盘组织中的两种间质细胞标志分子N-cadherin和Vimentin的表达。体外细胞实验与上述结果相同,骨化三醇(500nmol/L)处理能够显著抑制人正常滋养细胞中N-cadherin和Vimentin的表达。与此同时,高剂量胆钙化醇和骨化三醇(500 nmol/L)处理均下调了两种基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达。细胞划痕和Transwell实验结果显示骨化三醇(500nmol/L)处理抑制了人正常滋养细胞的迁移和侵袭能力。结论孕期高剂量胆钙化醇补充部分可通过抑制胎盘细胞增殖和滋养细胞上皮间质转化,导致胎盘发育受损,继而诱发宫内生长受限。