赤拟谷盗隶属于鞘翅目拟步甲科,是一种重要的世界性储粮害虫。本文以赤拟谷盗为研究对象,详细研究赤拟谷盗幼虫、蛹和成虫分别经历恒温28(对照组)、36、42℃亚致死高温胁迫0、1、5、10、15 h后的耐热性变化,并利用高通量测序技术对高温胁迫处理前后赤拟谷盗幼虫、蛹和成虫的转录组进行分析,筛选赤拟谷盗经历短期亚致死高温胁迫后与耐热性相关的差异基因,进一步通过实时荧光定量PCR技术对与耐热有关的差异表达基因进行验证,最后采用RNA干扰技术验证关键耐热基因功能,为进一步理解昆虫热适应性的分子机制以及合理制定热处理杀虫方案提供理论依据。主要研究结果如下。赤拟谷盗幼虫、蛹和成虫经历短期亚致死高温热胁迫均会使其耐热性增强,其中赤拟谷盗幼虫、蛹、成虫经历42℃胁迫10 h后耐热性均显著高于其他各处理组。运用IlluminaHiSeq2500高通量测序技术对经历28(对照组)、36、42℃亚致死高温胁迫10 h后的赤拟谷盗幼虫、蛹和成虫进行转录组分析,并对差异表达基因进行GO注释、KEGG代谢通路分析和Nr比对,得出4类与热胁迫相关的Unigene在赤拟谷盗应对热胁迫时上调表达:(1)与氧化有关的基因(编码超氧化物歧化酶基因、编码细胞色素P450酶基因、编码NADH基因、编码acyl-coa dehydrogenase基因、编码NADP基因、编码ATPase基因等),(2)与发育相关基因(编码类致死必需蛋白基因(protein lethal(2)essential for life)),(3)与ATP结合有关基因(热激蛋白基因(heat shock protein,HSP)),(4)负责编码各种转移功能蛋白质基因。实时荧光定量PCR分析结果表明,经热胁迫后的赤拟谷盗幼虫、蛹和成虫体内的多种热激蛋白家族基因显著上调表达,其中包括小热激蛋白家族(LOC662168、LOC662203、LOC664068)、热激蛋白70家族(LOC663293、HSP68a、HSP68b)基因;此外还有一个编码未知功能蛋白基因LOC656546也在赤拟谷盗三种虫态经历热胁迫时显著上调表达,并且上述基因在42℃热胁迫表达量显著高于36℃热胁迫表达量,这与42℃热胁迫后的赤拟谷盗幼虫、蛹和成虫耐热性显著高于36℃热胁迫的结果一致。通过RNAi技术对赤拟谷盗幼虫和蛹的编码热激蛋白70的基因HSP68a和编码未知功能蛋白基因LOC656546分别进行沉默后发现,赤拟谷盗幼虫和蛹的耐热性均显著下降,表明这两个基因的上调表达对赤拟谷盗幼虫和蛹热适应性提高方面有重要作用。