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胱硫醚β-裂解酶(Cystathionineβ-lyase,CBL)是蛋氨酸生物合成途径中的关键酶,能催化胱硫醚裂解产生同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy),丙酮酸和氨。血浆中Hcy的测定已经成为诊断维生素B12、叶酸缺乏及早期心脑血管等疾病的常用方法。目前,Hcy主要的检测方法之一是酶循环法。该法操作简单,检测速度快,准确度高。CBL是该法测定中的一种关键酶,所以,克隆表达出高活性的CBL并应用于该法是很有意义的。本文通过NCBI数据库搜索CBL基因序列,选择从大肠杆菌K12(E.coli K12)的基因组中扩增CBL目的基因,将基因与质粒载体p ET-28a(+)连接,并转化到表达宿主E.coli BL21 Gold(DE3)plysS中,成功获得重组菌pET-28a-CBL,经IPTG诱导后,可表达大小约为42 kDa的可溶性蛋白,具有高的胱硫醚β-裂解酶(CBL)活性。诱导表达后,将重组菌细胞超声破碎,离心,上清液经融合蛋白纯化试剂盒MagExtractor-His-tag-的Ni亲和纯化,获得一电泳纯的蛋白,比酶活(CBL酶活)可达58.24 U/mg,回收率为48%,纯化倍数为3.66倍。研究表明,重组CBL酶的最适反应pH在8.0-8.5之间,最适反应温度在35℃左右。该酶在1535℃下比较稳定,保温4h可残留90%以上的相对活性;该酶在p H 8.0-8.5中最稳定,在pH 7.08.0之间保温4 h(4℃)均能残留80%以上的活性。1mM的金属离子K+、Mg2+、Fe2+、Ca2+对CBL活性有不同程度的提高;Co2+、Zn2+、Ni2+对酶活性的有较强的抑制作用。本文研究了重组CBL在酶循环法测定Hcy中的应用。实验结果表明,在三种酶的典型浓度下(CBS=0.014mg/ml、LDH=0.028 mg/ml、CBL=0.04 mg/ml),反应速率与Hcy浓度成良好的线性关系。所用酶适用于循环法测定Hcy。