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柔嫩艾美耳球虫是七种鸡球虫中致病力最强的虫种之一，寄生于盲肠中，危害十分严重。虫体顶复合器中含有多种具有分泌功能的细胞器。其中，微线细胞器分泌的EtMIC1和EtMIC2蛋白在虫体粘附、入侵宿主细胞时起重要作用。目前研究表明EtMIC1、EtMIC2蛋白具有较好的免疫保护力，相关报道称EtMIC1、EtMIC2蛋白在球虫发育阶段的早期表达，但在其内生性发育的后期是否表达目前尚无报道。为了研究微线蛋白EtMIC1、EtMIC2在球虫整个内生性发育阶段表达的动态变化，本研究进行了以下工作：1.单克隆抗体的制备克隆了EtMIC1、EtMIC2基因，利用原核表达的EtMIC1、EtMIC2蛋白和本实验室保存的真核蛋白EtMIC1、EtMIC2免疫BALB/c小鼠。免疫的BALB/c小鼠抗体效价达到单克隆抗体制备的标准后，经细胞融合、间接ELISA筛选、两次亚克隆获得稳定分泌单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞。扩大培养收集细胞培养上清离心后作为单克隆抗体。结果得到了3组单克隆抗体。抗EtMIC1原核蛋白的单克隆抗体：1-H2；抗EtMIC1真核蛋白的单克隆抗体：1-A1、1-C4；抗EtMIC2真核蛋白的单克隆抗体:9-B9、4-C11。2.单克隆抗体的鉴定利用间接ELISA检测不同稀释度的单克隆抗体。结果显示1-H2、9-B9的效价为1:100，其它的效价为1：10稀释，这3组单抗的亚型均为IgG1。以间接免疫荧光技术定位本实验室酵母表面展示的EtMIC1、EtMIC2蛋白和标记子孢子实验鉴定单抗。镜检均观察到荧光，子孢子进行western blot印迹，与单克隆抗体作用（一抗），DAB显色后分别得到了100KD和50KD左右的目的条带，大小与之前报道的相符。3. EtMIC1、EtMIC2在柔嫩艾美耳球虫整个内生性发育阶段表达的动态变化2周龄的鸡人工感染柔嫩艾美耳球虫后，从90h开始杀鸡取盲肠，利用间接免疫荧光技术两种单抗分别标记不同发育阶段的虫体和Western blot方法双重检测EtMIC1、EtMIC2蛋白在柔嫩艾美耳球虫配子体阶段的表达情况。利用间接免疫荧光技术，单克隆抗体与裂殖体、裂殖子、配子体作用后，镜下观察到荧光；对含有裂殖体、配子体的肠组织进行western blot印迹，与单克隆抗体作用后（一抗），分别得到了100KD和50KD左右的目的条带，大小与理论值相符。结果显示，EtMIC1和EtMIC2蛋白在柔嫩艾美耳球虫整个内生性发育阶段均表达。