海洋微生物壳聚糖酶菌株筛选及培养条件

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:lelerui
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壳聚糖酶是一种降解壳聚糖的专一性水解酶,可用于制备功能性的壳寡糖。本研究立足于从海洋微生物中寻找高活性壳聚糖酶来源,以期对酶法制备壳寡糖的规模化生产及应用研究提供实验依据和理论基础。本研究样品来源于大连金石滩凉水湾潮间带的海水、海壳、海泥、海藻,通过透明圈法和摇瓶复筛测酶活法从海泥水洗液中筛选出一株产壳聚糖酶活性较高的菌株N-8作为出发菌株,该菌株产酶活性为0.235U/ml。根据菌株在不同培养基上生长形态的不同,将此出发菌株接于察氏培养基、麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基和壳聚糖培养基中进行三点培养,八字培养,并在显微镜下观察小室培养及大培养的菌株形态。依此对该出发菌株进行初步的菌种鉴定,鉴定结果为黄曲霉群。实验中,对碳源种类,氮源种类,最佳碳源浓度,最佳氮源浓度,海水添加量,培养基初始pH值,摇瓶装量,接种量,发酵培养温度,培养时间进行了一系列单因素实验。在此基础上,通过响应面分析法得出培养基最佳组成:葡萄糖添加量3.0%,壳聚糖添加量1.939%,蛋白胨添加量0.171%,陈海水添加量40%,培养基初始pH7.44;并对其培养条件进行了正交试验,结果为:在温度22℃,摇瓶发酵4天,接种量2%,摇瓶装量20%时该菌株产酶活性最高。在最佳培养基组分与最佳培养条件下发酵,测其酶活力为0.379U/ml,比优化前提高了61.28%。
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