【摘 要】
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目的:研究诱导绿色荧光蛋白标记的胚胎干细胞(GFP-ESCs)定向分化为视网膜干细胞的可能性及条件,探讨诱导后细胞与海马源性NSCs培养分化特性的异同点,及其在视网膜变性鼠眼内
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目的:研究诱导绿色荧光蛋白标记的胚胎干细胞(GFP-ESCs)定向分化为视网膜干细胞的可能性及条件,探讨诱导后细胞与海马源性NSCs培养分化特性的异同点,及其在视网膜变性鼠眼内移植后存活分化情况.以便为青光眼性视神经损害及其他视神经视网膜退行性疾病的治疗开辟一条新途径.结论:(1)GFP-ESCs体外培养扩增的同时仍维持其未分化状态、正常二倍体核型,及体内外多向分化潜能的生物学特性,可持续稳定表达较强的绿色荧光.为ESCs诱导分化及体内示踪研究奠定了坚实基础.(2)建立体外诱导体系,联合纯化的乳鼠视网膜Müller细胞和视黄酸,对GFP-ESCs进行视网膜特异性定向诱导,通过NSCs无血清培养基筛选富集7d,可获得大量视网膜样干细胞.鉴定证实,诱导细胞具备视网膜特异的NSCs特征,表达视网膜干细胞的标志基因,且有分化为功能性视网膜细胞的潜在可能.(3)纯化的Müller细胞对ESCs向视网膜样干细胞定向分化起到促进作用,Müller细胞分泌的bFGF等细胞因子可能是重要的影响因素.(4)ESCs源性视网膜样干细胞比海马源性NSCs来源更加方便充足,有更强的扩增能力和向神经元分化的潜能.(5)GFP-ESCs源性视网膜样干细胞在变性视网膜中可存活、整合,并有优先向变性的RGCs及感光细胞分化的倾向.有望为青光眼等视神经视网膜病变的细胞移植治疗提供来源充足、视网膜特异的、低免疫原性且安全有效的种子细胞.
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