论文部分内容阅读
目的:探讨钙离子螯合剂BAPTA-AM和钙离子载体A23187对胃癌SGC7901细胞GRP78表达水平的影响,分析GRP78表达改变对胃癌细胞侵袭转移能力的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:体外培养人胃癌SGC7901细胞株,并将其分为BAPTA-AM处理组、对照组和A23187处理组,采用RT-PCR和Western-blot检测各组细胞GRP78在mRNA和蛋白水平的表达,经体外侵袭实验和伤口愈合实验检测各组细胞侵袭和转移能力的变化,运用免疫细胞化学、Western-blot检测各组细胞E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白的表达,分析GRP78在胃癌细胞转移中的作用机制。结果:1. A23187组、对照组、20μmol/LBAPTA-AM组、40μmol/LBAPTA -AM组以及60μmol/LBAPTA-AM组GRP78-mRNA与内参β-actin的灰度值之比分别为:1.070±0.005、1.011±0.012、0.701±0.009、0.543±0.009以及0.348±0.013,GRP78-mRNA在A23187组的表达量较对照组升高(P<0.01),在3个BAPTA-AM组的表达量较对照组降低(P<0.01);A23187组、对照组及40μmol/LBAPTA-AM组GRP78蛋白与内参β-actin的灰度值之比分别为:0.911±0.004、0.823±0.007、0.647±0.015,GRP78蛋白在A23187组的表达量较对照组升高(P<0.01),在BAPTA-AM组的表达量较对照组降低(P <0.01)。2. A23187组48小时划痕愈合程度较对照组升高(79.68%±0.91% vs 57.32%±0.80%,P<0.01),每视野细胞平均数较对照组增加(89±2 vs 59±2,P<0.01);BAPTA-AM组48小时划痕愈合程度较对照组降低(39.92%±0.79% vs 57.32%±0.80%,P<0.01),每视野细胞平均数较对照组减少(43±1 vs 59±2,P<0.01)。A23187组侵袭转移能力较对照组增强,BAPTA-AM组侵袭转移能力较对照组减弱。3.免疫细胞化学、Western blot实验结果显示,A23187组E-钙粘蛋白的表达水平较对照组降低(0.106±0.003 vs 0.122±0.003,P<0.01; 0.495±0.010 vs 0.709±0.008,P<0.01),BAPTA-AM组E-钙粘蛋白的表达水平较对照组升高(0.133±0.003 vs 0.122±0.003,P<0.01;0.915±0.017 vs 0.709±0.008,P<0.01);A23187组N-钙粘蛋白的表达水平较对照组升高(0.143±0.003 vs 0.131±0.003,P<0.01;0.541±0.009 vs 0.344±0.006,P<0.01 ), BAPTA-AM组N-钙粘蛋白的表达水平较对照组降低(0.104±0.004 vs 0.131±0.003,P<0.01;0.210±0.004 vs 0.344±0.006,P<0.01)。结论:BAPTA-AM可下调胃癌细胞SGC7901中GRP78的表达,而A23187则可诱导其表达。GRP78的表达水平可影响胃癌细胞的侵袭和转移能力,其机制可能与GRP78改变了E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白的表达从而影响了肿瘤的上皮间叶转化水平有关。