新城疫病毒(NDV)、禽白血病病毒(ALV)、禽传染性支气管炎病病毒(IBV)、禽传染性法氏囊病病毒(IBDV)是最常见的四种禽病的致病因子,给家禽养殖业带来了巨大的经济损失。为初步了解野生鸟类中NDV、ALV、IBV、IBDV的病毒感染状况,本实验基于四种病毒基因组的特异性高度保守核酸序列,设计了四对通用引物,克隆得到目的片段重组质粒,通过正交法优化四重RT-PCR反应体系,建立了可同时检测NDV、ALV、IBV、IBDV的四重RT-PCR检测方法,并进行了特异性和灵敏度检验,最后对67只野生鸟类的四种脏器进行了实际样本检测。结果表明,该方法可以扩增得到大小不一的四种目的片段158 bp (NDV)、131 bp (IBV)、 109 bp (ALV)、94 bp (IBDV);特异性实验表明该方法可以有效检出四种病毒任意混合样品,但检测不出马利克病毒、禽痘病毒、禽减蛋综合征病毒和禽流感病毒；灵敏度实验表明该方法可检出102 copy的pMD-18T-NDV,102 copy的pMD-18T-ALV,10 copy的pMD-18T-IBV,10 copy的pMD-18T-IBDV。实际样本检测显示,该方法可以从野生鸟类脏器组织中检出四种病毒。结论：优化后的四重RT-PCR检测方法可应用于NDV、ALV、IBV、IBDV的临床诊断和流行病学研究。