【摘 要】
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研究目的白及在中国广泛应用于治疗创伤性出血和消化性系统疾病。白及的主要化学成分白及多糖因结构复杂、分子量大、粘稠度高而难以深入研究。因此,本研究拟将白及多糖水解成白及寡糖,并对白及寡糖的结构进行分析,同时通过3%葡聚糖硫酸钠（Dextran Sulfate Sodium,DSS）构建的溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）模型阐明白及寡糖改善UC的作用机制,为UC的预防与治疗提
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研究目的白及在中国广泛应用于治疗创伤性出血和消化性系统疾病。白及的主要化学成分白及多糖因结构复杂、分子量大、粘稠度高而难以深入研究。因此,本研究拟将白及多糖水解成白及寡糖,并对白及寡糖的结构进行分析,同时通过3%葡聚糖硫酸钠（Dextran Sulfate Sodium,DSS）构建的溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）模型阐明白及寡糖改善UC的作用机制,为UC的预防与治疗提供新的策略。研究方法1.白及寡糖的结构分析首先采用高效液相色谱法确认白及寡糖的单糖组成及其相应的摩尔比。其次,通过红外光谱分析、甲基化分析以及核磁共振分析鉴定白及寡糖的结构。2.UC模型的构建与白及寡糖抗UC的药效学研究选用6周龄的雄性BALB/c小鼠为研究对象,随机分为4组:Ctrl组、DSS组、BO组、DSS+BO组。采用3%DSS诱导UC,并给予白及寡糖（200mg/kg/d）干预,造模时间为7天,以体重变化、疾病活动指数评分、结肠长度、脾脏指数、结肠病理切片和血清Lipocalin-2的水平为评判指标,评价白及寡糖的药理活性。3.白及寡糖对肠道炎症与结肠损伤的影响研究采用实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹、免疫荧光、免疫组化等分子生物学技术,检测UC小鼠的炎症指标在mRNA和蛋白水平的表达,例如Tnf-α、Nlrp3和Il-1β等。此外,为评价白及寡糖对UC小鼠结肠组织的保护作用,本研究采用结肠组织切片染色检测UC小鼠的粘蛋白和紧密连接蛋白的表达。4.白及寡糖对肠道菌群及其代谢产物的影响研究采用16S rDNA测序技术检测UC小鼠肠道菌群的变化,同时提取小鼠粪便中胆汁酸、短脂肪酸和色氨酸代谢产物并采用液相色谱/气相色谱-质谱仪检测菌群代谢产物的含量,证明白及寡糖对UC小鼠肠道菌群及其代谢产物的调控作用。此外,通过抗生素实验进一步验证肠道菌群在白及寡糖改善UC中的重要作用。5.白及寡糖对胆汁酸肝肠循环的影响研究采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹技术,检测UC小鼠肠道与肝脏的胆汁酸受体的表达,深入探讨白及寡糖对UC小鼠的胆汁酸肝肠循环异常的调节作用。研究结果1.白及寡糖由甘露糖和葡萄糖组成,相应的摩尔比为5.2:1。2.白及寡糖的主要骨架为（1→4）-α-D-Man、（1→2）-α-D-Man 和（1→2）-α-D-Glc。3.白及寡糖改善UC小鼠的生理指标,如减缓体重下降、增加结肠长度和降低脾脏指数。4.白及寡糖不仅显著抑制UC小鼠肠道炎症因子的表达,而且促进UC小鼠结肠组织水通道蛋白、粘蛋白和紧密连接蛋白的表达。5.白及寡糖恢复UC小鼠的肠道菌群的多样性,降低Parabacteroides、Bacteroides、Oscillibacter 和 等细菌的丰度,增加Ruminococcaceae NK4A214 group、Odoribacter 和 Prevotellaceae UCG-001等细菌的丰度,有效地调节UC小鼠的肠道菌群紊乱。6.白及寡糖部分逆转UC小鼠粪便中胆汁酸、短链脂肪酸和5-羟色胺的改变。7.抗生素实验表明,在没有肠道菌群的作用下,白及寡糖无法改善抗生素处理小鼠的症状,而白及寡糖发酵液可减缓体重下降、减轻便血程度、降低脾脏指数和增加结肠长度。8.白及寡糖有效调节肠道与肝脏胆汁酸受体的表达,改善UC小鼠胆汁酸的肝肠循环。研究结论本研究初步探讨白及寡糖改善UC的作用机制,结果显示白及寡糖可通过调节肠道菌群组成与肠道代谢产物抑制UC小鼠的肠道炎症与结肠损伤,为今后UC的预防与治疗提供科学依据。
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