目的 研究解毒三根汤对人结肠癌耐药细胞株HCT-8/5-FU的逆转耐药作用,观察解毒三根汤干预前后细胞凋亡情况以及各实验组药物干预后细胞总蛋白中PERK-eif2α-ATF4-CHOP信号通路及MRP表达水平的变化,初步探讨解毒三根汤逆转结肠癌HCT-8/5-FU细胞株耐药机制可能的分子机制。方法1 采用倒置显微镜观察、细胞计数以及CCK-8分析法,从细胞形态、生长曲线、5-FU半数抑制浓度IC50值三个方面对人结肠癌耐药细胞HCT-8/5-FU与亲本细胞(即非耐药细胞HCT-8)进行横向比较。2 以人结肠癌耐药细胞株HCT-8/5-FU为研究对象,采用CCK-8分析法测定解毒三根汤单用及与浓度梯度的5-FU联用对细胞增殖抑制率的影响,由此求取逆转耐药倍数(RF)。3 用流式细胞仪(FCM)检测不同药物处理组(空白对照组、5-FU组、解毒三根汤组、联合组)干预24H后细胞凋亡率,进一步验证解毒三根汤协同5-FU对耐药细胞的诱导凋亡作用。4 Western Blot法检测各实验组(空白对照组、5-FU组、解毒三根汤组、联合组)药物干预48H后所提取细胞总蛋白中PERK、P-PERK、eif2α、P-eif2α、ATF4、CHOP、MRP的表达水平。结果①耐药指数(RI):5-FU 对 HCT-8 的 IC50 值:26.20lug/ml;对 HCT-8/5-FU 的 IC50值:535211ug/ml。RI 值为 20.43。②解毒三根汤单药的细胞毒性作用:不同浓度解毒三根汤(4、5、6、8、10mg/ml)对 HCT-8/5-FU 生长抑制率分别为:(1.015±0.065)%,(10.739±0.551)%,(16.970±0.484)%,(82.958±0.594)%,(97.678±0.546)%。③逆转耐药倍数(RF):低、中、高浓度协同组的IC50值分别为429.875ug/ml,303.887ug/ml,58.665ug/ml,RF 值分别为 1.245,1.761,9.123。④流式细胞术结果:药物干预24H后,与对照组相比,各药物干预组凋亡百分比均有增加(P<0.05)。其中解毒三根汤高浓度组及其协同组诱导细胞凋亡作用更加明显(P<0.01)。协同组与两药单用组相比,细胞凋亡率进一步提高(P<0.05),体现了两药的协同作用。协同组早期凋亡率较两药单用组提高(P<0.01)。⑤Western Blot结果:与对照组及5-FU组相比,高浓度协同组PERK、P-PERK、eif2α、ATF4、CHOP蛋白表达量均有显著增加(P<0.01),MRP蛋白表达量显著减少(P<0.01)。此外,低浓度组、低浓度协同组、高浓度组与对照组及5-FU组相比,CHOP蛋白表达量也明显增加(P<0.01),MRP蛋白表达量显著减少(P<0.01)。结论①解毒三根汤能显著逆转人结肠癌耐药细胞株HCT-8/5-FU的耐药性;②解毒三根汤逆转结肠癌耐药的作用可能是通过诱导细胞凋亡及降低耐药蛋白MRP实现;③内质网应激诱导细胞凋亡途径中的PERK-eif2α-ATF4-CHOP通路的活化可能是介导解毒三根汤逆转耐药过程的主要分子机制。