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本论文以绍兴鸭为研究对象,重点研究了日粮中添加不同种类脂肪酸(fattyacids)对其生产性能、血清指标、肉质pH及脂肪酸组成,蛋黄脂肪酸组成的影响;探讨了日粮中不同种类脂肪酸对脂质代谢相关基因表达水平上的影响;根据鸭原代肝实质细胞分离培养方法,研究了日粮多不饱和脂肪酸单体对体外肝细胞增殖及细胞周期的影响,并直接研究亚油酸(LA)、二十碳五烯酸(EPA)单体对肝细胞脂类代谢基因的影响,为研究绍兴鸭脂肪代谢和调控机理提供依据。
1.日粮不同种类脂肪酸对绍兴鸭生产性能、血清指标的影响
为了研究日粮不同种类的脂肪酸对绍兴鸭生产性能、血清指标的影响,本试验将264只17周龄健康、体重相近的蛋鸭随机分成4组,每组66只(含3个重复,每个重复22只)进行饲养试验。对照组饲喂基础日粮,试验组分为鱼油组(含3%鱼油),葵花籽油组(含2.5%葵花籽油),高脂组(含3%棕榈油+2%牛油)。结果表明:除了鱼油组能够提高产蛋率,其他各组都不能显著改变绍兴鸭的生产性能;与对照组相比,鱼油组显著降低血清TG和TC含量(P<0.05),SOD活性在各实验组都有不同程度的升高,高脂组MDA含量显著高于其他各组(P<0.05),肝组织切片观察发现,高脂组饲料导致绍兴鸭肝细胞内的脂肪富集。
2.日粮不同种类脂肪酸对绍兴鸭肌肉脂肪酸组成和蛋品质的影响
为了研究日粮不同种类的脂肪酸对绍兴鸭肉质pH、肌肉脂肪沉积及脂肪酸组成的影响。本试验将264只17周龄健康、体重相近的蛋鸭随机分成4组,每组66只(含3个重复,每个重复22只)进行饲养试验。对照组饲喂基础日粮,试验组分为鱼油组(含3%鱼油),葵花籽油组(含2.5%葵花籽油),高脂组(含3%棕榈油+2%牛油)。结果表明:pH值在48h以内逐渐降低,pH值从6.55降低到5.5。随着饲料中脂肪含量的增加,肌肉中的脂肪沉积量也增加,两者存在正相关,肌肉和蛋黄中的n-3PUFA总量在鱼油组最高,而n-6PUFA总量在葵花籽油含量最高,脂肪酸含量的变化充分反映了日粮的脂肪酸组成。鱼油组显著降低了肌肉和蛋黄中n-6/n-3 PUFA的比值(P<0.01),在肌肉中n-3 PUFA主要以沉积EPA为主,而在蛋黄中主要以沉积DHA为主。
3.日粮不同种类脂肪酸对脂类代谢相关基因表达的影响
本试验利用Q-PCR技术研究不同种类脂肪酸对绍兴鸭脂类代谢相关基因表达的影响。结果表明:与对照组相比,添加脂肪酸后ACC、FAS、SR-1、SCD等脂肪合成相关基因的mRNA表达水平大都显著降低(p<0.05),除了高脂组SCD基因的表达量没有显著变化;脂肪氧化基因PPAR-α和ACOX的mRNA表达水平则显著升高(p<0.05);脂类转运相关基因L-FABP mRNA表达水平增加(p<0.05),ApoB mRNA表达水平L-FABP基因变化趋势则相反,再添加脂肪酸后mRNA表达水平降低。
4.亚油酸(LA)、二十碳五烯酸(EPA)对绍兴鸭肝实质细胞增殖的影响及脂质相关基因表达影响
大量研究发现LA和EPA影响哺乳动物细胞增殖和脂类代谢基因的表达,但是在水禽中少有报道,本实验在鸭肝实质细胞培养基内加入LA和EPA单体,结果发现:LA和EPA单体在0-100μM的范围内可以促进肝细胞的增殖并且存在一定的剂量依赖性关系,流式细胞仪检测细胞周期发现,100μM LA和EPA促进了G0/G1到S期的转化,在LA组S期的细胞含量从7.8%增加到11.4%,而在EPA组S期的细胞含量从7.8%增加到10.5%。PPAR-α、ACOX、LPL、L-FABP等脂类氧化相关基因的表达量也发生了变化,其中PPAR-α、ACOX、LPL基因在添加LA和EPA后显著增加(P<0.05),但是L-FABP基因的表达量却未发生变化。对于脂类合成相关基因SR-1、FAS、SCD基因的表达量显著升高(P<0.05),ACC基因表达量在加入LA和EPA并未受到显著影响。
5.紫苏籽提取物对绍兴鸭生产性能、血清生化指标及脂类代谢相关基因的影响
紫苏籽种子油中含有大量的不饱和脂肪酸本实验选择产蛋高峰期230只青壳Ⅱ号,随机分为2个处理,每组5个重复,每个重复23只。试验全期42d。空白组喂给基础日粮(不添加任何药物),试验组在基础日粮中添加200mg/kg紫苏籽提取物。每天记录产蛋率,蛋重,料蛋比,于42日后每组剖杀3只试验鸭,静脉采血,分离血清,测定血清生化指标。结果表明:添加200mg/kg紫苏籽提取物可显著降低血清TC含量,提高血清HDL含量和产蛋率(P<0.05),另外添加200mg/kg紫苏籽提取物在一定程度上可降低血清中TG含量(P>0.05)。添加200mg/kg紫苏籽提取物后脂类合成相关基因SREBP-1、ACC、SCD、FAS、ApoB的表达量显著降低,而脂类氧化相关基因PPARa和ACOX基因mRNA的表达量显著升高(P<0.05),同样L-FABP基因的表达量也升高。
综上所述,饲养试验研究表明,日粮不同种类的脂肪酸对绍兴鸭生产性能、血清指标的产生不同程度的影响。肌肉和蛋黄中的脂肪酸含量的变化充分反映了日粮的脂肪酸组成,其中n-3PUFA总量在鱼油组最高,而n-6PUFA总量在葵花籽油含量最高。添加脂肪酸后ACC、FAS等脂肪合成相关基因的mRNA表达水平显著降低;脂肪氧化基因PPAR-α和ACOX的mRNA表达水平升高。LA和EPA单体在0-100μM的范围内可以促进鸭肝实质肝细胞的增殖并且存在一定的剂量依赖性关系,并且促进了脂类氧化合成相关基因的表达。添加200mg/kg紫苏籽提取物可显著降低绍兴鸭血清TC含量,提高血清HDL含量和产蛋率,对脂肪氧化合成相关基因也产生一定的影响。