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阿帕替尼是新型的口服小分子血管生成抑制剂,选择性地作用于血管内皮细胞生长因子受体-2（VEGFR-2）,抑制肿瘤血管生成,进而抑制肿瘤生长。其在人体内生物利用度高,主要通过CYP3A4/5和CYP2D6酶代谢,有良好的安全性和耐受性,并有较好的客观缓解率及生存获益。右美沙芬（Dextromethorphan,DM）是应用最广泛的非处方类镇咳药,主要通过CYP2D6酶代谢,并且常作为CYP2D6酶的底物。本实验通过建立LC-MS/MS法测定大鼠血浆中阿帕替尼及右美沙芬的浓度,并对其进行方法学验证,初步研究两者的药代动力学及药物相互作用,为临床合理用药提供依据。第一部分 阿帕替尼在大鼠体内血药浓度测定方法的建立及右美沙芬对阿帕替尼药代动力学的影响目的:建立LC-MS/MS法测定大鼠血浆中阿帕替尼的浓度,探讨右美沙芬对阿帕替尼的药代动力学影响。方法:1.LC-MS/MS法测定大鼠血浆中阿帕替尼浓度色谱柱:Kinetex C8（2.10×100 mm,2.6μm）;流动相:0.2%甲酸/10 mM乙酸铵水溶液（A）-甲醇（B）,pH:3.21;流速梯度洗脱:0.01-1.0 min,0.2ml·min-1;1.0-2.0 min,0.2-0.4 ml·min-1;2.0-3.5 min,0.4 ml·min-1;3.5-3.51min,0.4-0.2 ml·min-1;3.51-4.50 min,0.2 ml·min-1,70%B。采用电喷雾离子源（ESI）,多反应监测（MRM）正离子模式检测。阿帕替尼定量离子对:m/z 398.2→211.9,内标替硝唑定量离子对:m/z 248.0→121.1,血浆样品处理采用乙腈蛋白沉淀法。2.右美沙芬对阿帕替尼的药代动力学影响研究SD大鼠18只,按体重随机分为2组,阿帕替尼对照组、右美沙芬对阿帕替尼作用实验组,右美沙芬给药剂量为10 mg/kg,连续给药7天,第八天单次给予阿帕替尼60 mg/kg,于给药前（0 h）及给药后0.25、0.5、1、1.25、1.5、2、3、4、6、8、12 h眼内眦静脉取血0.5 ml,LC-MS/MS法测定阿帕替尼的血药浓度。采用DAS 3.0非房室模型模拟药代动力学参数,SPSS 21.0对两组药动学参数进行统计学分析。P<0.05认为两组参数存在显著性差异。结果:1.LC-MS/MS法测定大鼠血浆中阿帕替尼浓度阿帕替尼在5-1000 ng/ml范围内线性关系良好,相关系数均大于0.996,最低定量限为5 ng/ml。阿帕替尼的日内及日间精密度RSD（%）均小于10.0%,准确度在94.0%-108.0%范围内,基质效应及提取回收率分别为98.0%-107.0%和95.0%-104.0%,各种条件下的稳定性、残留效应及血浆稀释10倍后的稳定性,均符合生物样品定量分析方法验证指导原则。2.右美沙芬对阿帕替尼的药代动力学影响连续给药右美沙芬7天的实验组,与阿帕替尼单用对照组比较,对照组与实验组的Clast分别为23.45±19.63 ng/ml、13.56±30.95 ng/ml,两组比较有统计学差异（P<0.05）,其它参数AUC（0-t）、AUC（0-∞）、MRT（0-t）、MRT（0-∞）、t1/2、Tmax、Vz/F、CLz/F及Cmax两组比较均无统计学差异。第二部分 右美沙芬在大鼠体内血药浓度测定方法的建立及阿帕替尼对右美沙芬药代动力学的影响目的:建立LC-MS/MS法测定大鼠血浆中右美沙芬的浓度,探讨阿帕替尼对右美沙芬的药代动力学影响。方法:1.LC-MS/MS法测定大鼠血浆中右美沙芬浓度色谱柱:Kinetex C8（2.10×100 mm,2.6μm）;流动相:0.1%甲酸/10mM乙酸铵的水溶液（A）-乙腈（B）,pH:3.48;梯度洗脱:0.01-0.50 min,45%B;0.50-1.50 min,45%-80%B;1.50-3.50 min,80%B;3.50-3.51 min,80%-45%B;3.51-4.50 min,45%B。采用电喷雾离子源（ESI）,多反应监测（MRM）正离子模式检测。右美沙芬定量离子对:m/z 272.1→147.1,内标替硝唑定量离子对:m/z 248.0→121.1,血浆样品处理采用乙腈蛋白沉淀法。2.阿帕替尼对右美沙芬的药代动力学影响研究SD大鼠34只,按体重随机分为4组,右美沙芬对照组（3天）、阿帕替尼对右美沙芬作用实验组（3天）,每组8只;右美沙芬对照组（7天）、阿帕替尼对右美沙芬作用实验组（7天）,每组9只。阿帕替尼给药剂量为40 mg/kg,分别连续给药3天或7天,并分别第4天或第8天单次给予右美沙芬15 mg/kg,于给药前（0 h）及给药后0.25、0.5、0.75、1、1.33、1.66、2、3、4、6、8、12 h眼内眦静脉取血0.5 ml,LC-MS/MS法测定右美沙芬的血药浓度。采用DAS 3.0非房室模型模拟药代动力学参数,SPSS 21.0对两组药动学参数进行统计学分析。P<0.05认为两组参数存在显著性差异。结果:1.LC-MS/MS法测定大鼠血浆中右美沙芬浓度右美沙芬在2-400 ng/ml范围内线性关系良好,相关系数均大于0.996,最低定量限为2 ng/ml。右美沙芬的日内及日间精密度RSD（%）均小于8.0%,准确度在93.0%-107.0%范围内;基质效应及提取回收率分别为86.0%-101.0%和86.0%-94.0%,各种条件下的稳定性、残留效应及血浆样品稀释5倍后的稳定性,均符合生物样品定量分析方法验证指导原则。2.阿帕替尼对右美沙芬的药代动力学影响连续给药阿帕替尼3天的实验组,与右美沙芬单用对照组比较,对照组与实验组的AUC（0-t）分别为678.60±281.19 ng/ml·h、293.56±67.84ng/ml·h,AUC（0-∞）分别为699.27±289.72 ng/ml·h、307.55±71.30 ng/ml·h,Vz/F分别为76.18±69.88 L/kg、179.20±85.40 L/kg,CLz/F分别为25.39±11.27 L/h/kg、50.70±9.66 L/h/kg,以上参数两组比较均有统计学差异（P<0.05）,其他参数MRT（0-t）、MRT（0-∞）、Clast、t1/2、Tmax及Cmax两组比较均无统计学差异。连续给药阿帕替尼7天的实验组,与右美沙芬单用对照组比较,对照组与实验组的MRT（0-t）分别为2.15±0.31 h、2.78±0.64 h,MRT（0-∞）分别为2.49±0.55 h、3.35±1.13 h,两组比较有统计学差异（P<0.05）,其他参数AUC（0-t）、AUC（0-∞）、Clast、t1/2、Tmax、Vz/F、CLz/F及Cmax两组比较均无统计学差异。结论:1.本研究建立了LC-MS/MS法分别测定大鼠血浆中阿帕替尼及右美沙芬的浓度,两种分析方法快速、准确、灵敏度高、专属性强,适用于阿帕替尼及右美沙芬的药代动力学研究。2.通过对阿帕替尼单药组及右美沙芬与阿帕替尼联用组的药动学参数进行比较,结果显示,右美沙芬显著改变了大鼠体内阿帕替尼的Clast,而对其他药动学参数无影响。3.阿帕替尼连续给药3天组与对照组比较,大鼠体内右美沙芬的主要药代动力学参数均有显著改变,AUC（0-t）及AUC（0-∞）明显降低,Vz/F和CLz/F显著升高;阿帕替尼连续给药7天组与对照组比较,大鼠体内右美沙芬的主要药代动力学参数除MRT（0-t）、MRT（0-∞）外,其他参数均无统计学差异。