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本论文以探究采用ESI-MSn和HPLC-ESI/MS快速分析复杂的混合皂苷类成分的方法为目的,通过相互补充,相互佐证,层层递进的方式,对葫芦巴皂苷类成分进行了较全面的ESI-MSn和HPLC-ESI/MS分析。
葫芦巴(Trigonellafoenum-graecumL.)是豆科蝶形花亚科植物,含有丰富的皂苷类成分,从已得到的葫芦巴皂苷来看,主要以呋甾烷型皂苷为主。我们研究的步骤和成果如下:
第一步用70%的乙醇溶液对葫芦巴种子进行提取,然后用萃取和大孔树脂法等除掉大部分多糖、粘液质和黄酮等杂质,得到葫芦巴总皂苷,再用硅胶柱进行总皂苷的初步分离,得到三个皂苷混合组分F1、F2、F3,分别进行分析。
第二步主要通过ESI正负离子一级质谱分析,得到关于皂苷分子量信息,检测出包含十九个分子量的皂苷(F1-1-F1-9、F2-3-F2-4、F3-1、F3-3、F3-4和T-1-T-5),并分析了呋甾烷型皂苷的一级质谱特征。
第三步我们以薯蓣皂苷标准品的多级裂解特征为依据,对葫芦巴皂苷的六个主要皂苷成分F1-5、F3-3、F3-1、F1-3、F1-7和F2-3进行了钠加合以及锂加合离子的ESI-MSn裂解,分析了其可能的结构,鉴定了其中四个成分可能分别为文献报道的葫芦巴皂苷A-1、葫芦巴皂苷F-1、葫芦巴皂苷Ⅳ和甲基原薯蓣皂苷,并总结了皂苷的多级质谱裂解特征。
最后,我们进行了葫芦巴皂苷的HPLC-ESI/MS(SIM模式)分析,从F1、F2、F3和皂苷全样这四个样品中我们一共得到了包含十六个分子量的三十多个葫芦巴皂苷的选择离子流色谱图,对葫芦巴皂苷的色谱行为及同分子量皂苷的情况有了直观的了解。
通过以上的研究,我们对葫芦巴皂苷的分子量、部分的皂苷的结构以及同分子量皂苷情况都有了深入的了解,并体会到ESI-MSn和HPLC-ESI/MS法对快速分析复杂的皂苷成分具有很大的优越性。ESI质谱具有灵敏度高、省时和样品用量少等优点。高效液相色谱本身具有强大的分离功能,而质谱本身既是一种检测器,又能提供一定的分离功能和结构解析功能,将二者有利地结合并合理有效地利用其功能,能快速深入地对复杂的已知或未知皂苷类成分进行鉴定和结构分析。