【摘 要】
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背景:非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是近年来肝病死亡和肝脏移植的主要原因之一,其发病机制与游离脂肪酸（FFA）在肝细胞内的过多积聚及脂质过氧化损伤有关。过度FFA流入肝内会导致肝细胞发生脂肪样变性并诱导氧化应激,最终导致肝损伤。循环中的绝大多数FFA通过脂肪酸转运蛋白转运入肝。其中,脂肪酸转运蛋白CD36是肝细胞摄取FFA的重要转运体之一,其表达受LXRα等核受体调控,LXRα的活化与负责调控氧
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背景:非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是近年来肝病死亡和肝脏移植的主要原因之一,其发病机制与游离脂肪酸（FFA）在肝细胞内的过多积聚及脂质过氧化损伤有关。过度FFA流入肝内会导致肝细胞发生脂肪样变性并诱导氧化应激,最终导致肝损伤。循环中的绝大多数FFA通过脂肪酸转运蛋白转运入肝。其中,脂肪酸转运蛋白CD36是肝细胞摄取FFA的重要转运体之一,其表达受LXRα等核受体调控,LXRα的活化与负责调控氧化还原平衡的NRF2信号通路密切相关。水飞蓟宾在保肝利胆、降脂降糖、抗氧化、抗炎、抗癌、抗纤维化等方面有良好的药理效应,临床上广泛用于肝胆相关疾病治疗。有研究表明水飞蓟宾在治疗NAFLD时常伴随核因子NRF2表达的上调。那么,水飞蓟宾可否通过激活NRF2信号通路、下调脂肪酸转运蛋白CD36的表达进而对抗脂质蓄积和脂质过氧化?这值得我们深入研究与关注。目的:利用HepG2细胞构建FFA诱导的脂质过氧化模型,深入研究水飞蓟宾对NRF2信号通路和CD36表达的影响及其抗脂质蓄积和抗脂质过氧化作用机制,为临床上水飞蓟宾治疗脂质代谢紊乱相关疾病提供理论基础与实验依据。方法:1、采用FFA（棕榈酸钠:油酸钠比例=1:2）干预24 h,构建HepG2细胞脂质过氧化模型。2、在上述模型基础上,采用油红O染色实验并检测TG、TC、SOD、MDA等指标,研究水飞蓟宾的抗脂质蓄积和抗脂质过氧化作用,同时采取RT-qPCR、Western-blot等方法研究水飞蓟宾对NRF2信号通路和CD36表达的影响。3、在上述研究基础上,使用RNA干扰技术沉默NRF2,进一步研究水飞蓟宾在NRF2沉默后HepG2细胞中的抗脂质蓄积和抗脂质过氧化作用及其对NRF2信号通路和CD36表达的影响。结果:1、在HepG2细胞中,FFA干预24 h可诱导细胞内脂滴含量显著增加,TG、TC含量显著增加,SOD含量显著降低,MDA含量显著增加,表明脂质过氧化模型构建成功。2、FFA干预24 h后,HepG2细胞中NRF2 mRNA表达无明显差异,LXRα和CD36的mRNA表达均显著上调;NRF2总蛋白表达无明显差异、NRF2核蛋白表达显著减少、NRF2胞浆蛋白表达显著增加;FXR及SHP蛋白表达显著下降;LXRα总蛋白和核蛋白均显著增加,其下游成脂基因SREBP1、FAS蛋白表达显著增加,脂肪酸转运蛋白CD36蛋白表达显著增加,脂质代谢相关基因PPARα及CPT-1蛋白表达显著增加。3、水飞蓟宾同时干预24 h后,HepG2细胞中的脂滴含量、TG含量、TC含量、MDA含量显著减少,SOD含量显著增加。同时,NRF2 mRNA表达无显著性变化,LXRαmRNA表达无显著性变化,CD36 mRNA表达显著降低。水飞蓟宾可促进NRF2入核活化、FXR及SHP蛋白表达上调、LXRα入核减少,SREBP1、FAS、CD36等蛋白表达下调。脂质代谢相关基因PPARα及其下游靶基因CPT-1的蛋白表达上调也被水飞蓟宾同时干预24h后逆转。4、在沉默NRF2的HepG2细胞中,水飞蓟宾干预组与模型组相比,TG含量、SOD含量均无显著性差异,FXR及SHP蛋白表达、LXRα核蛋白及CD36蛋白表达均无显著性差异。沉默NRF2的水飞蓟宾干预组与未沉默NRF2的水飞蓟宾干预组相比,水飞蓟宾的降TG作用和升SOD作用显著减弱,水飞蓟宾上调FXR及SHP蛋白表达,减少LXRα入核活化、下调CD36蛋白表达的作用也被显著减弱。结论:1、在HepG2细胞中,水飞蓟宾有较好的对抗FFA所导致的脂质蓄积及脂质过氧化作用。2、水飞蓟宾在HepG2细胞中的抗脂质蓄积和抗脂质过氧化作用主要与其激活NRF2信号通路、上调FXR及SHP蛋白表达,进而抑制LXRα活化入核并下调脂肪酸摄取基因CD36表达有关。
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