鸡球虫病是鸡感染艾美耳属球虫后引起的一种肠道疾病,鸡球虫病每年对全世界禽类养殖业造成巨大的损失。目前该病的防治主要依靠化学药物和疫苗,但是抗球虫药的滥用导致的耐药性产生使新药的开发迫在眉睫。鸡球虫生活史复杂,其发育主要经过孢子生殖、裂殖生殖和配子生殖三个阶段。裂殖生殖是鸡球虫的无性生殖阶段,此阶段伴随着球虫裂殖子入侵宿主细胞、在宿主细胞中大量增殖并破坏宿主细胞的过程。球虫在入侵过程中虫体和宿主会在蛋白质水平上出现变化,而蛋白质是生理功能的执行者,对蛋白质结构和功能的研究直接阐明物种生理和病理的变化机制。因此,研究球虫裂殖生殖时期宿主蛋白的变化对阐明球虫的致病机理、发现潜在的药物作用靶点及免疫防治具有重要意义。本研究收集了正常雏鸡盲肠和裂殖生殖时期(E.tenella感染120小时)雏鸡盲肠,盲肠样本经蛋白提取、胰酶酶解、TMT标记、HPLC分级、修饰富集、LC-MS/MS分析、数据库搜索,之后采用蛋白注释、蛋白质功能富集、基于蛋白功能富集的聚类分析和蛋白互作网络分析进行生物信息学分析。蛋白质组学分析结果显示:蛋白质差异表达分析发现717个差异表达蛋白,其中包括373个上调蛋白和344个下调蛋白。随后我们对所鉴定到的差异蛋白进行了蛋白注释、差异表达蛋白的功能分类、差异表达蛋白功能富集分析、聚类分析和蛋白互作网络分析。分析结果显示差异蛋白大致与细胞骨架、细胞凋亡、炎症反应、代谢和功能、核糖体有关。宿主的细胞骨架相关的蛋白表达量发生变化(例如血影蛋白、锚蛋白1、中心体相关蛋白等),提示柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)的侵入可能对宿主细胞骨架产生影响;同样我们发现在细胞凋亡通路中的关键效应物质Caspase8、Bcl-2蛋白出现上调,提示E.tenella可能介导宿主细胞的凋亡来帮助裂殖子的分裂增殖。总之,E.tenella可能通过调节宿主细胞的凋亡、炎症反应、代谢等功能方便自身的增殖,同时下调相应免疫反应逃避宿主的清除作用。这为了解球虫的分子机制和寻找新的药物靶点提供了信息。乙酰化修饰蛋白组学结果显示:经生物信息学分析得到150个差异乙酰化修饰蛋白,其中有80个上调和70个下调差异蛋白,在这些乙酰化蛋白上鉴定到211个差异乙酰化修饰位点,其中108个上调,103个下调。通过对差异乙酰化蛋白的功能分类、功能富集分析、蛋白互作网络分析和聚类分析。分析结果显示4E-BP1、Cullin 3-E3泛素连接酶、己糖激酶2、鸟苷酸结合蛋白1和血小板反应蛋白1等与细胞周期、细胞凋亡和信号传导有关的蛋白在乙酰化水平上发生变化,提示E.tenella可能通过乙酰化修饰来调节宿主细胞的细胞周期、细胞凋亡、代谢等来便于自身的发育。有趣的是我们鉴定到乙酰化蛋白在一种新型的细胞死亡方式Ferroptosis途经中富集下调,这可能成为筛选药物的一个新的靶标。这些数据填补了E.tenella感染宿主后宿主蛋白组和乙酰化修饰蛋白组的数据空缺,为更好的了解球虫和宿主之间的互作关系提供了基础。